【原理】
D-乳酸鹽＋NAD+— D-LDH →丙酮酸鹽＋NADH＋H+
L-乳酸鹽＋NAD+ — L-LDH →丙酮酸鹽＋NADH＋H+
丙酮酸鹽＋L-*鹽—GPT → L-*＋2-酮戊二酸
D/L-乳酸檢測試劑盒
【原理】
D-乳酸鹽＋NAD+— D-LDH →丙酮酸鹽＋NADH＋H+
L-乳酸鹽＋NAD+ — L-LDH →丙酮酸鹽＋NADH＋H+
丙酮酸鹽＋L-*鹽—GPT → L-*＋2-酮戊二酸
【測定條件及檢測步驟】
波 長：340 nm
光 徑：1.00㎝
溫 度：20~37 ℃
測 定 時：以水或空氣校準(zhǔn)；
樣品溶液：樣品中D+L-乳酸濃度為0.03-0.2g/l
準(zhǔn) 確 率：在給定條件下，質(zhì)控溶液變異在5 %
| 空 白 | 樣 品 |
R1 | 1000 | 1000 |
R2 | 200 | 200 |
R3 | 20 | 20 |
蒸餾水 | 1000 | 900 |
樣品溶液 | -- | 100 |
混合均勻后讀取吸光度值 | A1 | A1 |
R4 | 20 | 20 |
混合反應(yīng)45分后讀取吸光度值 | A2 | A2 |
R5 | 20 | 20 |
混合反應(yīng)45分后讀取吸光度值 | A3 | A3 |
【樣品前處理】
1. 對無色、透明、中性樣品可直接進(jìn)行稀釋，使D/L-乳酸濃度到0.03-0.2g/ l之間；
2. 對混濁的樣品溶液要先過濾或離心，再進(jìn)行稀釋（同1）。
3. 通過過濾或添加NaHCO3除去樣品中含有的CO2，直至溶液呈微堿性后再稀釋(同1)。
4. 用KOH 或NaOH 調(diào)節(jié)至pH8~10后，溫育幾分鐘，或?qū)Σ恍枵{(diào)節(jié)pH值的溶液可直接進(jìn)行稀釋（同1）。
5. 測定有色樣品時要設(shè)置空白對照。
6. 對于顏色很深的樣品加入PVPP或聚酰胺脫
色，使?jié)舛仍龃?/span>（比如到1g/100ml），混
合，再溫育幾分鐘，過濾。
7. 對固體樣品粉碎（粒徑< 0.3 mm）或者均質(zhì)（固體/半固體樣品），然后用水提取或溶解，過濾，如果需要稀釋就參見步驟1。
8. 對含有脂肪的樣品，可將樣品加入盛有熱
水的100ml定量瓶中進(jìn)行抽提，溫度要高于
脂肪的熔點。再調(diào)整溫度到20 ℃，定容到
刻度。然后放在冰上大約15分鐘或冰箱保鮮
層30分鐘，過濾。對含脂肪樣品也可直接用
Carrez試劑進(jìn)行凈化（*此法）。
9. 用Carrez試劑去除樣品中的蛋白質(zhì),
用高氯
酸也可脫去樣品中的蛋白質(zhì)。
10. 血液樣品的處理過程:
①離心處理后的125ul血清加入625ul 4℃的HCL04（0.6M）
②蝸旋震蕩5 mins后，冰浴10mins\
③3.4000rpm離心10 mins
④取500ul上清液加入300ul K2CO3(0.5M)⑤蝸旋震蕩5mins后，冰浴10mins
⑥離心后，取上清液用于酶法分析。
