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產品介紹:
PF-562271是有效的ATP競爭性的可逆FAK和Pyk2激酶抑制劑，IC50分別為1.5和13nM。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！ 號：717907-75-0 純度：99.36% 分子量：507.49 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
中文名稱：可逆FAK和Pyk2激酶抑制劑(PF-562271)
英文名稱：PF-562271
產品規格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg
貨號：FS-X10928
實驗報告：
一、分離與培養： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養； 5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
阿穆爾斯克灣鹽地桿菌人α淀粉Bacillus cereus小鼠血管生成4(ANG-4)
黑腐皮殼菌人堿性磷Bacillus cereus小鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)
核黃氧化德沃斯氏菌人天青殺Bacillus cereus小鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)
蕈狀芽孢桿菌人血管緊張肽ABacillus cereus小鼠主要組織相容性復合體Ⅲ類(MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ)
膠紅酵母人胰淀粉Bacillus cereus小鼠主要組織相容性復合體Ⅲ類(MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ)
牛輪狀病（可訂購）人α烯化Bacillus cereus小鼠E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)
蠟狀芽孢桿菌人膠原IIBacillus cereus小鼠E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)
冷海水黃桿菌人膠原IBacillus cereus小鼠CD30分子(CD30)
短芽孢桿菌人磷化蛋白激CBacillus cereus小鼠CD30分子(CD30)
毛殼人磷化外信號調節激Bacillus cereus小鼠主要組織相容性復合體Ⅱ類(MHC-Ⅱ/H-2Ⅱ
黑曲霉人乙酰酯Bacillus cereus小鼠主要組織相容性復合體Ⅱ類(MHC-Ⅱ/H-2Ⅱ
Brevibacillus parabrevis人葡萄糖氧化Bacillus cereus小鼠可溶性血管內皮蛋白C受體(sEPCR)
克魯斯假絲酵母人酪羥化Bacillus cereus小鼠可溶性血管內皮蛋白C受體(sEPCR)
紅托竹蓀人多巴脫羧Bacillus cereus小鼠嗜粒趨化因子(ECF)
硬結節桿菌人非神經元性烯化Bacillus cereus小鼠嗜粒趨化因子(ECF)
伯克霍爾德氏菌人多巴-β羥化Bacillus cereus小鼠嗜粒趨化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)
WD重復蛋白16抗體蠶蛹1號小鼠肝細胞AML12（干細胞庫保藏）
WW結構域E3泛連接1抗體平菇2000（京瑞）大耳山羊肺細胞
乙型肝炎X相關蛋白2抗體PL20（雙抗黑平）正常小鼠睪丸Sertoli細胞
X射線修復交叉互補蛋白4抗體嗜熱側孢霉昆蟲細胞
可逆FAK和Pyk2激酶抑制劑(PF-562271)費比恩塞伯林德納氏酵母 二烯基二硫二酰
綠粘帚霉 三縮四乙二過氧化物體增殖物激活受體α
枯草芽胞桿 甲基烯羥乙酯過氧化物體增殖物激活受體β
簇生黃韌傘 鄰乙氧基苯甲酰腺活化蛋白激
尖孢鐮刀 對甲苯磺甲酯乙酰羧化
豇豆慢生根瘤 十四氨酰磷合成I
延長赤擔孢酵母 三叔丁色氧化
球孢毛殼 3-乙酰吡啶延胡索還原
哈茨木霉 2-乙酰吡啶酮
緊縮花褶傘 2,4,6-三溴乳脫氫
敵鼠鈉鹽速測包 甲合次硫氫鈉琥珀脫氫
堆形艾美耳球蟲 亞硝鈷鈉異檸檬脫氫
向日葵殼針孢 鉻鈉6-磷葡萄糖脫氫
薩赫里劍 次亞磷鈉生長
彎孢 化鍶補體蛋白3
