產(chǎn)品介紹:
CFSE/PI 雙染細胞毒性檢測試劑盒是利用細胞熒光染料CFSE(CFDA-SE)和PI對細胞進行染色,利用CFSE標記靶細胞,PI標記死的靶細胞來區(qū)分不同的細胞,活的靶細胞成綠色,死的靶細胞成紅色和綠色,從而檢測細胞毒性作用。根據(jù)不同的實驗方案設(shè)計,可以用來檢測化合物的細胞毒性作用。也可以用來檢測殺傷性T 細胞或NK 細胞介導(dǎo)的細胞毒作用。 CFDA-SE 是一種可對活細胞進行熒光標記的新型染料,可以標記活體細胞。CFDASE是一種帶有琥珀酰亞胺(NHS)的熒光染料,可以結(jié)合細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)。CFDASE在結(jié)構(gòu)上將酚羥基部位改造成AM體,所以自身不發(fā)熒光,熒光背景低,脂溶性高,能夠輕易穿透細胞膜,進入細胞內(nèi)的CFDASE的AM 部位能被細胞內(nèi)酯酶水解生成CFSE,通過共價結(jié)合賴氨酸側(cè)鏈的氨基而摻入細胞內(nèi)和細胞表面的蛋白,且結(jié)合后發(fā)出強的綠色熒光。CFSE的琥珀酰亞胺(NHS)和細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的氨基部位結(jié)合,固定在細胞內(nèi),不會漏出細胞外。CFSE進入細胞后定位于細胞膜、細胞質(zhì)和細胞核,在細胞核的熒光強。 CFSE毒性小,不影響細胞的增殖能力。此方法操作簡單,且不用放射性同位素,不存在安全隱患??梢愿焖伲鼫蚀_和更安全地得到想要的實驗數(shù)據(jù)。 CFSE/PI標記細胞后通常用流式細胞儀進行細胞毒性檢測。 CFSE標記細胞呈綠色熒光,熒光波長:λex=496 nm,λem=516 nm。流式檢測時的激發(fā)波長可以選擇488nm,此時的發(fā)射波長為516nm,使用流式細胞儀檢測時可以采用FL1 detection channel。PI標記細胞呈紅色熒光,流式檢測時的激發(fā)波長可以選擇488nm,此時的發(fā)射波長為647nm,使用流式細胞儀檢測時可以采用FL2 detection channel。 CFSE標記的細胞除了流式細胞儀檢測細胞毒性外,還可單染后用于細胞增殖檢測,或者用熒光酶標板定量活細胞數(shù)目,或者用熒光顯微鏡進行均一染色的細胞示蹤觀察。 儲存條件:CFSE探針-20℃避光保存;溶解液-20℃保存;PI染色液2-8℃避光保存。 有效期:六個月。 |
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號 |
500T | FS-X9715 |
注意事項:
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。
4、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會增加空白吸收,從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性,則測定不含細胞,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進行檢測。
9、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據(jù)細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定,對于大多數(shù)情況孵育 1 小時即可,白細胞需要培養(yǎng)較長時間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測,MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
睪(T)英文名:T 載脂蛋白C1抗體包裝1g
高鐵血紅蛋白(MHB)英文名:MHB 載脂蛋白C2抗體包裝5g
高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)英文名:HMGB-1 載脂蛋白L1抗體包裝1g
高遷移率族蛋白1(HMGB1)英文名:HMGB1 載脂蛋白L4抗體包裝5g
高敏三碘狀腺原(u-T3)英文名:u-T3 載脂蛋白L5抗體包裝100g
高敏狀腺(u-T4)英文名:u-T4 載脂蛋白M抗體包裝25g
高密度脂蛋白膽固(HDL-C)英文名:HDL-C 載脂蛋白O抗體包裝500g
高靈敏度促狀腺激(U-TSH)英文名:U-TSH β淀粉樣蛋白前體蛋白結(jié)合蛋白1抗體包裝5g
高爾基蛋白73(GP-73)英文名:GP-73 共濟失調(diào)性眼球運動功能喪失相關(guān)蛋白AOA1抗體包裝1g
高半胱(Hcy)英文名:Hcy 三號染色體開放閱讀框抗體包裝1g
干燥綜合征抗原B(SSB)英文名:SSB 腺嘌呤磷核糖轉(zhuǎn)移抗體包裝1g
干細胞因子/肥大細胞生長因子(SCF/MGF)英文名:SCF/MGF 磷化通道蛋白2抗體包裝25g
干擾誘導(dǎo)蛋白10(IP-10/CXCL10)英文名:IP-10/CXCL10 ADP核糖基化因子1抗體包裝5g
干擾調(diào)節(jié)因子5(IRF5)英文名:IRF5 乙型肝炎病X相關(guān)蛋白2抗體包裝1g
肝脂(HL)英文名:HL ADP核糖基化因子5抗體包裝5g
溴區(qū)結(jié)構(gòu)域相鄰鋅指蛋白1A抗體轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)Biapenem is a carbapenem antibiotic with activity against both Gram-positive and
CFSE/PI雙染細胞毒性檢測試劑盒Marisediminicola 1,3-環(huán)辛二烯(含穩(wěn)定劑叔丁基鄰苯二酚)含Ⅲ型纖連蛋白域蛋白5
新月彎孢 5,6-二氟-2-羧酸含IQ基元GTP激活蛋白1
Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum 5,6-二氟和肽
香菇 四金酸三水合物核苷酸還原M1
耐輻射奇球突變株 4-氨基乙酯核基質(zhì)蛋白22
柱狀環(huán)傘(柳菇、茶新菇) 4-乙酸乙酯鹽酸鹽核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白質(zhì)1
高大毛殼 酸性紫49核仁
Achromobacter denitrificans (S)-5-甲基-2-惡唑烷酮核仁形成區(qū)嗜銀蛋白
米根霉 DL-炔基甘核糖核酸
嗜果刀孢 4-派啶乙酸甲酯核纖層蛋白A;C
暗產(chǎn)色鏈霉 1,2-環(huán)己基二甲酸二甲酯核心蛋白聚糖
鏈霉 2,4,5-三氟芐核因子E2相關(guān)因子2
大腸埃希氏桿 2,4-二甲基肉桂酸核因子κB
蘇云金芽孢桿 2,4-二甲基肉桂酸核因子κB受體活化因子
蘋果黑腐皮殼 2-甲基-4-吡啶羧酸甲酯核因子κB受體活化因子配基