產(chǎn)品名稱(chēng) | 原代人外周血單核細(xì)胞 | 英文名稱(chēng) | Human Peripheral Blood Monocyte Cells |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 貨號(hào) | GOY-01X1231 |
組織來(lái)源 | 外周血 | 細(xì)胞形態(tài) | 圓形、巨噬細(xì)胞樣 |
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 半貼壁半懸浮
細(xì)胞形態(tài) 圓形、巨噬細(xì)胞樣
傳代特性 不增殖；不傳代
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人外周血單核分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱(chēng)為外周血干細(xì)胞，在二十一世紀(jì)初人類(lèi)開(kāi)始的生命方舟計(jì)劃中提出外周血這一新概念。單核細(xì)胞起源于骨髓中的造血干細(xì)胞，并在骨髓中發(fā)育。當(dāng)它們從骨髓進(jìn)入血液時(shí)仍然是尚未成熟的細(xì)胞。與其他血細(xì)胞比較，單核細(xì)胞內(nèi)含有更多的非特異性脂酶，并且具有更強(qiáng)的吞噬作用。單核細(xì)胞在血液中停留2-3天后遷移到周?chē)M織中，細(xì)胞體積繼續(xù)增大，直徑可達(dá)50-80μm，細(xì)胞內(nèi)所含的溶酶體顆粒和線(xiàn)粒體的數(shù)目也增多，成為成熟的細(xì)胞。固定在組織中的單核細(xì)胞稱(chēng)為組織巨噬細(xì)胞，它們經(jīng)常大量存在于淋巴結(jié)、肺泡壁、骨髓、肝和脾等器官。激活了的單核細(xì)胞和組織巨噬細(xì)胞能生成并釋放多種細(xì)胞毒、干擾素和白細(xì)胞介素，參與機(jī)體防衛(wèi)機(jī)制，還產(chǎn)生一些能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)的因子。在炎癥周?chē)鷨魏思?xì)胞能進(jìn)行細(xì)胞分裂，并包圍異物。
方法簡(jiǎn)介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人外周血單核采用密度梯度離心法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人外周血單核經(jīng)CD14免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、您收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作：
取出T-25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置4-6小時(shí)或過(guò)夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后換用新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。
2、細(xì)胞傳代：
1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2）添加0.125%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；
3）棄上清，沉淀細(xì)胞用12ml培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）待細(xì)胞貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。
3、細(xì)胞凍存：
1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2）添加0.125%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，再加入培養(yǎng)液終止消化，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；
3）用適當(dāng)量的凍存液（基礎(chǔ)培養(yǎng)基：FBS：DMSO=7:2:1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；
4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過(guò)夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。
4、細(xì)胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具）， 快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無(wú)結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細(xì)胞移至15ml無(wú)菌離心管中，滴加入培養(yǎng)液5ml混勻細(xì)胞，然后將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至適當(dāng)面積大小的培養(yǎng)皿中；
3）放置于37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
615小鼠乳腺癌瘤株；Ca763 | 615小鼠肺癌瘤株；HP615 |
615小鼠乳腺癌瘤株；Ca761 | 豬藍(lán)耳病毒天津株（TJM-F92）疫苗PCR檢測(cè)試劑盒（熒光-PCR法） |
615小鼠T細(xì)胞性白血病瘤株；L7912 | 貓皰疹病毒（FHV)PCR檢測(cè)試劑盒（熒光-PCR法） |
615小鼠乳頭狀肺腺癌瘤株；P615 | 犬細(xì)小病毒(CPV)PCR檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法) |
小鼠肝癌瘤株；H22 | 牛棒桿菌PCR試劑盒 |
615小鼠前胃癌瘤株；Fc | 鸚鵡熱衣原體（CP）PCR檢測(cè)試劑盒（熒光-PCR法） |
KM小鼠子宮頸癌瘤株；U14 | 羅湖病毒（TiLV）PCR檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法) |
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C57小鼠黑色瘤瘤株；ME（Me） | 羊源性成分PCR試劑盒 |
Walker氏癌肉瘤256瘤株；W256 | 乙型肝炎病毒cccDNA PCR試劑盒 |
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KM小鼠網(wǎng)織細(xì)胞肉瘤瘤株；LⅡ | 豬藍(lán)耳病病毒通用型(PRRSV-U)PCR檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法) |
T739小鼠肺腺癌瘤株；LA795 | 原代人外周血單核細(xì)胞豬鏈球菌通用型(SS-U)PCR檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法) |
615小鼠網(wǎng)織細(xì)胞性白血病瘤株；L615 | 貓杯狀病毒（FCV）PCR檢測(cè)試劑盒（熒光-PCR法） |
埃可病毒 30 型檢測(cè)試劑盒 | 豬圓環(huán)病毒通用型(PCV-U)PCR檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法) |
1) 將5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中，移入生物安全柜，
2) 從胸部解剖乳鼠，取出雙肺置于預(yù)冷的PBS中，盡可能的除去結(jié)締組織等，
3) 取肺邊緣部分，剪碎，將組織塊移入T25培養(yǎng)瓶中，倒置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中，
4) 2h后，培養(yǎng)瓶中注入2 mL內(nèi)皮培養(yǎng)基，小心將培養(yǎng)瓶正置于培養(yǎng)箱，確保組織塊不會(huì)飄起來(lái)，
5) 每3d換液2mL，待細(xì)胞從組織塊中爬出來(lái)后，隔2d換液，待細(xì)胞融合達(dá)到60-70%左右時(shí)，去除組織塊，將肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞重新鋪瓶。
