產(chǎn)品名稱 | 原代人角膜基質(zhì)細(xì)胞 | 英文名稱 | Human Corneal Stromal Cells |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 貨號 | GOY-01X1252 |
組織來源 | 眼角膜組織 | 細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 |
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞簡介：
人角膜基質(zhì)分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，中央部最薄。角膜有十分敏感的神經(jīng)末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會不由自主地合上以保護(hù)眼睛。為了保持透明，角膜并沒有血管，透過外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細(xì)胞層、前彈力層、基質(zhì)層、后彈力層、內(nèi)皮細(xì)胞層。角膜基質(zhì)層是角膜的主要組成部分，占據(jù)角膜厚度的90%，由角膜基質(zhì)細(xì)胞、膠原纖維和細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)成。角膜基質(zhì)層缺損的修復(fù)主要由角膜基質(zhì)細(xì)胞的增殖及分泌細(xì)胞外基質(zhì)完成。角膜基質(zhì)層具有結(jié)構(gòu)規(guī)整，透明度高的特點，正常情況下角膜基質(zhì)細(xì)胞分泌組成基質(zhì)層的成分，維持角膜的透明度，此細(xì)胞對于角膜損傷的修復(fù)具有重要意義。角膜基質(zhì)細(xì)胞，存在于角膜基質(zhì)層中，在正常情況下，處于靜止?fàn)顟B(tài)。但當(dāng)角膜損傷時，不同上皮來源的因子及環(huán)境信號，將影響角膜基質(zhì)細(xì)胞的應(yīng)答反應(yīng)，決定著角膜能否wan全被修復(fù)。
方法簡介：
公司實驗室分離的人角膜基質(zhì)采用膠原酶消化后組織貼塊法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實驗室分離的人角膜基質(zhì)經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、您收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作：
取出T-25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置4-6小時或過夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后換用新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。
2、細(xì)胞傳代：
1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2）添加0.125%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；
3）棄上清，沉淀細(xì)胞用12ml培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）待細(xì)胞貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。
3、細(xì)胞凍存：
1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2）添加0.125%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，再加入培養(yǎng)液終止消化，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；
3）用適當(dāng)量的凍存液（基礎(chǔ)培養(yǎng)基：FBS：DMSO=7:2:1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；
4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期保存。
4、細(xì)胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具）， 快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細(xì)胞移至15ml無菌離心管中，滴加入培養(yǎng)液5ml混勻細(xì)胞，然后將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至適當(dāng)面積大小的培養(yǎng)皿中；
3）放置于37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
人胚肺二倍體細(xì)胞；KMB-17 | 人宮頸癌細(xì)胞；HelaS3[HeLaS3] |
小鼠骨髓瘤細(xì)胞；Sp2/0-Ag14 | 鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒 |
非洲綠猴腎細(xì)胞；VERO | 馬鏈球菌（S. equi）PCR檢測試劑盒（熒光-PCR法） |
抗丙型肝炎病毒核心抗原單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株；HCV-C39 | 副豬嗜血桿菌(HPS)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
抗乙型肝炎病毒表面抗原單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株；HBS-r6 | 馬傳染性貧血（EIAV）PCR檢測試劑盒（熒光-PCR法） |
抗丙型肝炎病毒NS3抗原單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株；HCVNS3-57 | 牛結(jié)核分歧桿菌(MB)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
抗丙型肝炎病毒NS5抗原單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株；NS5 | PCR級MgCl2溶液（氯化鎂溶液），25 mM |
大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞 | 口蹄疫病毒通用RT-PCR試劑盒 |
抗呼吸道合胞病毒單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株；RSV-4C1 | 貓衣原體（CP）PCR檢測試劑盒（熒光-PCR法） |
抗戍型肝炎病毒單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株；HEV-4 | 沙眼衣原體PCR試劑盒 |
小鼠胚胎細(xì)胞；SC-1 | 伯氏疏螺旋體（伯氏包柔螺旋體）PCR試劑盒 |
小鼠結(jié)締組織L細(xì)胞株929克隆；L-929[L929] | 類鼻疽伯克霍爾德菌(BP)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
非洲綠猴腎細(xì)胞；CV-1 | 原代人角膜基質(zhì)細(xì)胞對蝦桃拉病毒(TSV)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞；H125 | 甲型流感（流感）病毒通用探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 |
登革病毒通用型檢測試劑盒 | 河弧菌(VF)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
1) 將5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中，移入生物安全柜，
2) 從胸部解剖乳鼠，取出雙肺置于預(yù)冷的PBS中，盡可能的除去結(jié)締組織等，
3) 取肺邊緣部分，剪碎，將組織塊移入T25培養(yǎng)瓶中，倒置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中，
4) 2h后，培養(yǎng)瓶中注入2 mL內(nèi)皮培養(yǎng)基，小心將培養(yǎng)瓶正置于培養(yǎng)箱，確保組織塊不會飄起來，
5) 每3d換液2mL，待細(xì)胞從組織塊中爬出來后，隔2d換液，待細(xì)胞融合達(dá)到60-70%左右時，去除組織塊，將肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞重新鋪瓶。
