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摘要本文件規(guī)定了T-2/HT-2毒素總量的膠體金快速定量檢測方法的原理、試劑、儀器設(shè)備及材料、樣品制備、樣品測定、結(jié)果描述和重復(fù)性。

  【儀表網(wǎng) 行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)】近日,由國家糧食和物資儲備局組織起草的《糧油檢驗 糧食中T-2 HT-2毒素的測定 膠體金快速定量法》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)已形成征求意見稿,現(xiàn)向社會公開征求意見,截止日期為2023年5月17日,意見反饋郵箱tc270sc1@ags.ac.cn。
 
  T-2/HT-2 毒素是由鐮刀菌屬中茄病鐮刀菌(Fusarium solani)等真菌代謝產(chǎn)生一種單端孢霉素類化合物,主要污染小麥、大麥、玉米、大豆等谷物及其加工制品,對人類健康及畜牧業(yè)構(gòu)成了較大危害。
 
  食品中 T-2/HT-2 毒素檢測方法有高效液相色譜法,高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法,這兩種方法的前處理復(fù)雜,儀器昂貴,無法滿足大批量食品樣品快速篩查的需求,因此,尋求一種快速,準(zhǔn)確,有效的 T-2/HT-2 毒素快速檢測方法十分必要。
 
  膠膠體金快速定量法是一種基于酶聯(lián)免疫法的基礎(chǔ)上結(jié)合單克隆抗體技術(shù)建立的新型檢測技術(shù),在糧食真菌毒素檢測領(lǐng)域運(yùn)用較為廣泛,在黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素和赭曲霉毒素 A 四種毒素上的檢測,已十分成熟。本標(biāo)準(zhǔn)項目利用膠體金免疫層析技術(shù)對糧食中 T-2/HT-2 毒素定量分析,可提高糧食樣品檢測、監(jiān)測效率,降低成本,保護(hù)環(huán)境,保障糧食質(zhì)量安全和人民群眾身體健康。
 
  本文件按照 GB/T 1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第 1 部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。參考GB/T 5491 糧食、油料檢驗 扦樣、分樣法;GB/T 6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法;GB/T 27404 實驗室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測等規(guī)程內(nèi)容編制。
 
  本文件規(guī)定了T-2/HT-2毒素總量的膠體金快速定量檢測方法的原理、試劑、儀器設(shè)備及材料、樣品制備、樣品測定、結(jié)果描述和重復(fù)性。本文件適用于小麥、玉米等糧食及其制品中T-2/HT-2毒素的快速定量檢測。
 
  原理:
 
  試樣提取液中T-2/HT-2毒素與檢測條中的膠體金微粒發(fā)生呈色反應(yīng),顏色深淺與試樣中T-2/HT-2毒素含量相關(guān)。用讀數(shù)儀測定檢測條上檢測線和質(zhì)控線顏色深淺,根據(jù)顏色深淺和讀數(shù)儀內(nèi)置曲線自動計算出試樣中T-2/HT-2毒素含量。
 
  儀器設(shè)備及材料:
 
  1.粉碎機(jī):可使試樣粉碎后全部通過 20 目篩。
 
  2.天平:分度值 0.01 g。
 
  3.漩渦振蕩器。
 
  4.濾紙:采用 Whatman 2V(或等效)濾紙。
 
  5.移液器:100 μL ~ 1000 μL、20 μL ~ 200 μL。
 
  6.離心機(jī):轉(zhuǎn)速不低于 4000 r/min。
 
  7.ROSA T-2/HT-2 毒素膠體金快速定量檢測條 1):需冷藏儲存,具體儲存條件參照使用說明;技術(shù)要求見附錄 A。
 
  8.孵育器:可進(jìn)行 45 ℃恒溫(控溫精度 ± 1 ℃)孵育。
 
  9.讀數(shù)儀:可測定并顯示膠體金定量檢測條的測定結(jié)果。
 
  樣品測定:
 
  1.將膠體金檢測條(6.7)從冷藏狀態(tài)(2 ℃ ~ 8 ℃)取出放置至室溫。將孵育器(6.8)預(yù)熱至 45 ℃。將檢測條(6.7)平放在孵育器(6.8)凹槽中,打開加樣孔。
 
  2.準(zhǔn)確移取 300 μL 待測溶液(7.3),加入檢測條加樣孔中,關(guān)閉加樣孔及孵育器(6.8)蓋。
 
  3.孵育 10 min 后,取出檢測條(6.7)觀察 C 線(質(zhì)控線)和 T 線(檢測線)的顯色情況。若出現(xiàn)下述情況,視為無效檢測。1) C線不出現(xiàn);2) C線出現(xiàn),但彌散或嚴(yán)重不均勻;3) C線出現(xiàn),但T1或T2線彌散或嚴(yán)重不均勻。
 
  4.選擇讀數(shù)儀(6.9)的 T2 檢測頻道,并設(shè)定為基質(zhì) 00(MATRIX 00),開始樣品測定,測定需在2 min 內(nèi)完成,讀數(shù)儀(6.9)自動顯示樣品中 T-2/HT-2 毒素的含量。
 
  若讀數(shù)儀顯示“ + 250ppb”,需移取 300 μL 待測溶液(7.3)于離心管中,加入 1.0 mL 稀釋緩沖液混勻后,按照 8.1 ~ 8.4 進(jìn)行測定,其中基質(zhì)設(shè)定為 01(MATRIX 01)。
 
  結(jié)果表述:
 
  試樣中T-2和HT-2毒素總含量由讀數(shù)儀自動計算并顯示,單位為微克每千克(μg/kg)。方法檢測限為5 μg/kg。
 
  重復(fù)性:
 
  在同一實驗室,由同一操作人員使用同一儀器,按照相同的測定方法,對同一被測試對象相互獨立進(jìn)行測試獲得的兩次獨立測試結(jié)果的絕對差值大于其算術(shù)平均值20%的情況不超過5%。
 
  更多詳情請見附件。

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