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骨骼肌細(xì)胞純化的具體辦法

時間:2020/2/25閱讀:201
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骨骼肌細(xì)胞的貼壁速度比非肌源性細(xì)胞慢,為此,可以用差速貼壁法取得較高純度的肌源性細(xì)胞。具體辦法是:

1.取原代培育早期的細(xì)胞(培育30~40h),經(jīng)洗刷后,用0.25%的胰蛋白酶溶液消化。細(xì)胞開端脫壁時以馬血清停止消化。

2.搜集脫壁的細(xì)胞,洗刷后用培育液制備成細(xì)胞懸液。

3.當(dāng)即接種到另一培育板上,貼壁40min。此時,大都非肌源性細(xì)胞現(xiàn)已貼壁,而骨骼肌細(xì)胞仍懸浮在培育液中,或沉降到培育板上但未貼壁。

4.吸出未貼壁細(xì)胞,計數(shù)后將細(xì)胞調(diào)至所需細(xì)胞濃度,進行接種。

5.接種后,骨骼肌細(xì)胞純度可到達90%以上。該辦法亦可用于直接經(jīng)胰蛋白酶溶液消化的肌肉組織細(xì)胞。

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