滴定曲線可由計(jì)算求得，也可通過測定電位直接得到。用指示劑變色確定終點(diǎn)利用了等當(dāng)點(diǎn)附近離子濃度的較大變化，只有在反應(yīng)比較*和pH突躍范圍大時(shí)變色才明顯。如果因其反應(yīng)*度低、突躍太小，可利用其他性質(zhì)，如電導(dǎo)、吸光度的變化作測定，稱為電導(dǎo)滴定(見電導(dǎo)分析法)和光度滴定。兩法中記錄整個(gè)滴定過程中溶液性質(zhì)的變化，由兩條直線(或其延長線)的交點(diǎn)確定終點(diǎn)(圖3)。如果反應(yīng)比較*，則等當(dāng)點(diǎn)及其附近的點(diǎn)都在兩條直線上;對反應(yīng)*度較差的滴定，等當(dāng)點(diǎn)及其附近的點(diǎn)雖然不在兩條直線上，但由兩條直線的延長線相交，仍可較準(zhǔn)確地確定終點(diǎn)。
PCDH1elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟　按 “載體兩性電解質(zhì) pH 梯度等電聚焦” 所述的方法配制 T=5%，C=3% 的等電聚焦凝膠，并進(jìn)行等電聚焦。為使在第二向電泳時(shí)，樣品分子有強(qiáng)的電荷，以便在短時(shí)間內(nèi)完成第二向電泳，保證滴定曲線的性以及為使樣品有完整的滴定曲線，一般應(yīng)選擇寬 pH 范圍（pH 3.5~9.5 或 pH 3.5~10 )。
向電泳結(jié)束后，切去電極條（電極條中的鹽會(huì)干擾第二向電泳 )，將此凝膠轉(zhuǎn) 90°。在與加樣孔平行的方向常規(guī)聚丙烯酰胺凝膠電泳用的電極條，（如進(jìn)行半干電泳)，加樣，然后盡快進(jìn)行第二向電泳，以免 pH 梯度擴(kuò)散。在第二向電泳時(shí)可以用相對比較高的電壓，電泳時(shí)間便大大縮短。
由于樣品中的高鹽和緩沖液離子在第二向電泳時(shí)的不均勻?qū)щ娦詴?huì)干擾結(jié)果，故應(yīng)用透析或其他方法脫鹽。
加樣量取決于凝膠的大小、厚度、加樣孔的大小和染色方法。如用考馬斯亮藍(lán)染色，5 倍于常規(guī)的量。
第二向電泳后，用表面電極測定 pH 梯度。