實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
?
參數(shù)規(guī)格：
產品名稱：甲型流感病毒(IAV)核酸檢測試劑盒
產品規(guī)格：50T
產品貨號：FS-P10268
產品分類：熒光PCR法
產品運輸：低溫運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產品特點：
本產品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產物，競爭性模板的產物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內標也被擴增。在PCR產物中，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物，擴增產物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗di高辛或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。
PCR的反應條件：
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小，設定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設定30秒～1分鐘；當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。
 -221℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

大腸埃希氏菌培養(yǎng)基: 0033遺傳研究提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 30℃ 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

蒼白彎孢生長條件: 25℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no

大島芽孢桿菌培養(yǎng)基: 821模式菌株: no土樣提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 37℃ -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法;其他

YIM45827模式菌株: no安全等級: 1種屬: Nocardia│sp.土壤提供形式: 凍干物培養(yǎng)基: 0038生長條件: 28℃

希爾正青霉培養(yǎng)基: 13模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 25℃ 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

曼達帕姆發(fā)光桿菌指示菌/發(fā)光細菌；發(fā)光基因研究模式菌株: no水樣/海水提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 471生長條件: 28℃

 -222℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

大腸埃希氏菌培養(yǎng)基: 33EA6突變于AtGSTZ，突變點為D67H，活力提高。提供形式: 凍結物安全等級: 2模式菌株: no生長條件: 37℃ 液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；定期移植法

楊鏈格孢培養(yǎng)基: 0014模式菌株: no植物提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 18-26℃ 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

淡紫擬青霉生長條件: 25培養(yǎng)基: 14提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no 定期移植法

南極棲海面菌培養(yǎng)基: 471微生物/耐冷菌沉積物/表層沉積物提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no生長條件: 15℃ 液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法

青霉屬培養(yǎng)基: CM0014抗癌活性提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28C 真空冷凍干燥

土壤桿菌能夠在含2000ppm嘧磺隆的無機鹽加2％葡萄糖平板生長。模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 0033生長條件: 30℃

 -223℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

CIP104972模式菌株模式菌株: yes種屬: Bacillus│oleronius提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 0002生長條件: 30℃

SilicateBacteriaMedium

Microbial Content Test Agar(Trypticase? Soy Agar with Lecithin and Polysorbate 80) incubation media Microbial Content Test Agar(Trypticase? Soy Agar with Lecithin and Polysorbate 80)

多主枝孢(蠟葉芽枝霉) 支/瓶

MFCAgar

YMAgar

溶液（和化鉀混合溶液）  (Potassium Iodide Mixed Solution)  50毫升

頭孢他啶  Ceftazidime  3毫克/支×5  添加于100mlHB4155

50%卵黃乳液  50% Egg-Yolk Solution  50毫升  卵黃瓊脂或卵黃瓊脂或甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂的配套試劑

卵黃多粘菌素B溶液  Egg-Yolk Polymyxin B Solution  50毫升  甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂基礎配套試劑
甲型流感病毒(IAV)核酸檢測試劑盒百里香酚蘭規(guī)格：25g用途：微生物指示劑

麥康凱瓊脂(MAC)規(guī)格：250g用途：用于腸道致病菌的選擇性分離培養(yǎng)

Korser氏枸椽鹽肉湯規(guī)格：100g用途：用于細菌枸椽鹽試驗(SN標準)

包姜氏瓊脂培養(yǎng)基規(guī)格：250g用途：用于百日咳菌分離培養(yǎng)

山梨醇發(fā)酵管-O157菌生化鑒定規(guī)格：20支詳情介紹

GC瓊脂規(guī)格：250g用途：用于淋球菌的分離培養(yǎng)