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當前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>核酸檢測試劑盒>>熒光PCR法>> 50T漢灘病毒核酸檢測試劑盒

漢灘病毒核酸檢測試劑盒

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產(chǎn)品型號50T

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2021-05-08 10:18:50瀏覽次數(shù):113次

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漢灘病毒核酸檢測試劑盒保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:漢灘病毒核酸檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品貨號:FS-P9941
產(chǎn)品分類:熒光PCR法
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
產(chǎn)品特點:
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟 
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此,實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎(chǔ)之上的:
1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現(xiàn)性*定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標和引物,內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標與靶模板的長度不同,二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物,擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合,再加入抗di高辛或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內(nèi)標,作出標準曲線,也可實現(xiàn)定量檢測目的。
rmFrizzled-1/Fc, CF (50 UG)名稱: 小鼠雜交瘤;HEV-NICPBP58 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmFractalkine (Chem Dom), CF (25 UG)名稱: 小鼠雜交瘤;HEV-NICPBP04 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmFractalkine (aa 29-102), CF (50 UG)名稱: 小鼠雜交瘤;ZUF10 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmFractalkine (aa 25-105), CF (25 UG)名稱: 小鼠雜交瘤;BDRXN RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmFlt-3L, CF (5 UG)名稱: 人胚胎干;HES3.1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmFlt-3L, CF (25 UG)名稱: 人胚胎干;Endeavour-1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmFlt-3L (5 UG)名稱: 小鼠雜交瘤;3G4 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmFlt-3L (25 UG)名稱: 小鼠雜交瘤;4D1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmFlt-3/Fc, CF (50 UG)名稱: 小鼠雜交瘤;8H5 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmFLRG, CF (25 UG)名稱: 小鼠雜交瘤;3C8 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmFLRG (25 UG)名稱: 小鼠雜交瘤;7H11 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmFGL2, CF (50 UG)名稱: 小鼠雜交瘤;10F7 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmFGF-8c, CF (25 UG)名稱: 小鼠雜交瘤;2F2b RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmFGF-8c (25 UG)名稱: 小鼠雜交瘤;3H5 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmFGF-8b, CF (25 UG)名稱: 小鼠雜交瘤;4D11 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmFGF-8b (25 UG)名稱: 小鼠雜交瘤;HZAVYL RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
漢灘病毒核酸檢測試劑盒人多巴胺(DA)ELISA試劑盒ONELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人促甲狀腺激素受體抗體(TSHR)ELISA試劑盒ONELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人高敏甲狀腺素(u-T4)ELISA試劑盒OPAsELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人谷氨脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)ELISA試劑盒OPGELISAKIT產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人甲肟前列腺素D2(PGD2-MOX)ELISA試劑盒OPGELISAKIT產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人甲狀旁腺激素(PTH)ELISA試劑盒OPGELISAKIT產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人甲狀腺刺激免疫球蛋白(TSI)ELISA試劑盒OPGLELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人抗促甲狀腺素受體抗體(TRAb)ELISA試劑盒OPGLELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
PCR的反應(yīng)條件:
因擴增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小,設(shè)定25~30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少,擴增量不足;如果循環(huán)次數(shù)太多,則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預(yù)備實驗可2℃間隔進行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設(shè)定30秒~1分鐘;當溫度設(shè)定在68℃以下時, 時間設(shè)定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴增產(chǎn)物;Anneal溫度太低時,容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外,Extension時間太短時,會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成;而Extension時間太長時,會出現(xiàn)Smear。

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