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樣品采集
選擇采集部位：通常從疑似感染松材線蟲病的松樹樹干、樹枝、樹皮等部位采集樣品。樹干可選取靠近基部或病變明顯區(qū)域;樹枝選取枯萎、變色部分;樹皮則選取有松脂滲出、變色或有蟲道痕跡的部位。
采集工具準備：準備好鋒利的刀具、鋸子、鑷子、密封袋或離心管等工具。刀具和鋸子要確保清潔，避免交叉污染。
采集操作：用刀具或鋸子截取適量木材樣本，一般長度為 5 - 10 厘米，直徑 1 - 2 厘米。若采集樹皮，可取 5 - 10 平方厘米大小。將采集的樣品放入密封袋或離心管中，標注好采集地點、時間、樹木編號等信息。
樣品粉碎
粉碎設(shè)備選擇：可使用組織研磨儀、粉碎機等設(shè)備。組織研磨儀能更均勻地粉碎樣品，但價格相對較高;粉碎機操作簡單，成本較低。
粉碎操作：將采集的樣品放入粉碎設(shè)備中，加入適量的液氮(若設(shè)備允許)，液氮可使樣品迅速冷凍變脆，便于粉碎。啟動粉碎設(shè)備，將樣品粉碎成細小的顆粒狀，一般粉碎至粉末狀，粒度在 0.1 - 1 毫米左右。
核酸提取
提取試劑準備：根據(jù)所選的核酸提取試劑盒說明書，準備好相應(yīng)的試劑，如裂解液、洗滌液、洗脫液等。
提取步驟：將粉碎后的樣品轉(zhuǎn)移至離心管中，加入適量的裂解液，充分混勻，使樣品中的細胞破裂，釋放出核酸。然后進行離心操作，去除雜質(zhì)和細胞碎片。接著加入洗滌液，多次洗滌沉淀，去除殘留的雜質(zhì)。最后加入洗脫液，將核酸洗脫下來，收集到干凈的離心管中。
核酸純化(可選)
純化目的：若提取的核酸中含有較多的雜質(zhì)，如蛋白質(zhì)、多糖等，可能會影響后續(xù)的檢測結(jié)果，此時需要進行核酸純化。
純化方法：可使用柱式純化法或磁珠純化法。柱式純化法是將核酸溶液加入到純化柱中，通過離心等方式使核酸吸附在柱子上，去除雜質(zhì)后再洗脫下來;磁珠純化法是利用磁珠與核酸的特異性結(jié)合，將核酸從溶液中分離出來。
樣品保存與運輸
保存條件：處理好的核酸樣品若不能立即進行檢測，應(yīng)將其保存在 -20℃或 -80℃的冰箱中，防止核酸降解。
運輸要求：在運輸過程中，要使用干冰或冰袋保持低溫環(huán)境，確保樣品的質(zhì)量不受影響。同時，要做好樣品的防護，避免樣品泄漏或損壞。
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