新城疫傳統的診斷方法主要依賴于病毒的分離和鑒定。但由于疫苗的廣泛應用，從現場分離到新城疫病毒或用各種方法檢測到新城疫病毒也不能肯定雞群發生的就是新城疫，因為分離到的新城疫病毒有可能是疫苗毒。要確定新城疫病毒毒株或分離物是哪一個毒力型，還必須進行系統的生物學試驗，測定毒力指數（MDT、ICPI、IVPl）。但這些試驗費時、費力、費錢，不適宜于臨床診斷應用。新城疫病毒分子結構和致病性關系研究的日益深入為新城疫特異性診斷技術，特別是從病原體角度建立株特異性鑒定技術的研究奠定了理論基礎，根據不同致病性新城疫病毒株存在的分子結構差異（核苷酸序列差異和氨基酸序列差異）使得應用單克隆抗體技術、核酸探針技術和PCR技術建立各種特異、快速的新城疫診斷方法成為可能。

核酸探針技術是在已獲得的病毒特異片段上標記放射性同位素或*作為探針而建立的一種分子雜交診斷方法，具有簡便、準確、靈敏等顯著優點。

1992年Jacecki-Black等利用特異性針對中發型和緩發型分離株的連接肽特性，設計了一個寡核苷酸，并用這個寡核苷酸作為探針進行狹縫印跡雜交，試驗證明該探針至少可檢出o．25一o．5／Lg的NDVRNA，病毒感染組織樣品和雞胚增殖均可用該辦法檢測，不足的是無法區分自然感染雞和免疫雞。

Jacecki-Black和King在用核苷酸探針檢測NDV的基礎上于1993年又建立了一種可以區分強毒株和弱毒株的同位素標記寡聚核苷酸探針技術，他們檢測了36個分離株，該探針可以與所有強毒株雜交，而不與任何低毒力毒株結合，而且，探針與其他禽類病毒無交叉反應+1998年Oherdorfer和Werner也報道建立了可以區分NDV的探針技術，該法可以對大量NDV樣品進行快速篩選。

Angela等（1998）利用RT—PCR擴增出362bp的包括F蛋白裂解位點序列的片段，制備成了相應的探針，并用PCR產物同型特異性探針雜交來區分在德國流行的強弱毒株。
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