少妇无码精品12P_99久久精品国产免费看_色.www_国产黄a三级三级三级看三级黑人_亚洲AⅤ无码一区二区波多野_久久123

上海金穗生物科技有限公司
免費(fèi)會員

Topl0F’細(xì)胞中的電轉(zhuǎn)化及文庫儲存

時(shí)間:2013-3-11閱讀:325
分享:

[方法]
1.加2~3ul純化的連接反應(yīng)物(大值為0.3ug DNA)到80ul的*0F’電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞中,輕輕搖晃混合。使用30ng(2ul)的pUCl9控制電轉(zhuǎn)化效率。
2.將細(xì)胞+DNA懸浮液轉(zhuǎn)移到已冷卻的0.2 cm細(xì)胞電轉(zhuǎn)化管,并冰浴3分鐘。
3,將Gene Pulser Plus電穿孔儀設(shè)置為2.5kV脈沖,電容器設(shè)為25uF,脈沖控制器設(shè)為200ns。
4.用紙巾干燥電轉(zhuǎn)化管,然后將它放在電轉(zhuǎn)化箱中,使用一個(gè)脈沖(寄存時(shí)間常量必須為4.5~5.0毫秒)。
5.立即加lmlLB到電擊管中,打散細(xì)胞,然后將細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移到15ml聚丙烯試管中。
6.在37℃下振蕩,使細(xì)胞能夠表達(dá)抗抗生素的標(biāo)記。
7.組合所有的電轉(zhuǎn)化樣品,通過100ul適當(dāng)稀釋后均勻地倒在小LBAT平板上來確定文庫的大小,用pUCl9控制電轉(zhuǎn)化能產(chǎn)生大約3×107的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。
8.在20℃,2500g下旋轉(zhuǎn)組合電轉(zhuǎn)化樣品15分鐘,在0.5XLBAT起始體積中打散沉淀顆粒,將1 ml細(xì)胞懸浮液涂抹在每一平方LBAT平板上。
9.在37℃過夜孵育該板。
10.在每個(gè)平方板上灑上10ml LBAT以獲得文庫,,用無菌延輾機(jī)敲碎細(xì)胞,將已打散的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到50ml聚丙烯試管中。
11.重復(fù)實(shí)驗(yàn)方案12.10,用5m1 LBAT除去板上留下的細(xì)胞。
12.在600nm測量細(xì)胞懸浮液的光密度(OD),如果有必要,可以將濃縮的細(xì)胞系稀釋到每毫升LBAT 40 OD600nm單位。
13.制備甘油菌,將5ml的甘油加到5ml的濃縮細(xì)胞系中,混合后均等地分到1m1聚丙烯冷凍管中,在-70℃冷凍及儲存,后細(xì)胞濃度將是每毫升20 OD600nm位,這大約是每毫升1.6×1010個(gè)細(xì)胞。

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~
在線留言
主站蜘蛛池模板: 性夜影院爽黄A爽免费 | 麻豆美女裸体aaaa片 | 色第一页 | 免费观看作爱视频网站 | 视频成人 | 国产wwwxx| 亚洲欧洲国产精品久久 | 国产一级大毛片 | 国产美女精品视频线免费播放软件 | 日韩中文字幕亚洲一区二区va在线 | 国产成人午夜精华液 | 看一级黄色毛片 | 国内精品久久久久精品 | 无码人妻一区二区三区免费N鬼沢 | 天天摸天天草 | 逼自拍偷拍自拍天堂偷拍 | 99久久久久免费精品国产 | 91亚洲精品一区 | 久久精品国产精品国产精品污 | 久久综合九色综合97网 | 波多野结衣无码免费视频 | 狠狠久久永久免费观看 | 洋洋av久久久久久久一区 | 欧美激情第五页 | 久久久99精品成人片 | 久久久久国产精品一区二区三区 | 国产精品久久久久久久婷婷 | 亚洲日韩在线中文字幕线路2区 | 四虎影视最新网站 | 国产极品美女高潮抽搐免费网站 | 日本亚洲欧洲色α | 久草在线免费在线观看 | 久久这里只有精品18 | 中文字幕天天干 | 亚洲手机在线播放 | 亚洲a成人v | 91精品国产日韩一区二区三区 | 国语少妇高潮对白在线 | 91popn国产在线| 亚洲国产一级毛片 | 超碰偷拍 |