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上海金穗生物科技有限公司
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噬菌體DNA/RNA結合性篩選的標準器材和試劑

時間:2013-3-15閱讀:310
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構建好噬菌體展示文庫后,可以通過連續的幾輪親和篩選,快速地分離出具有新的核酸結合特性的多肽異變體。這可以很方便地通過如下方法得以實現:針對固定在鏈親和素(streptavidin)包被的基質上的、合成的*標記的DNA或RNA靶標,對文庫進行鑒定。未結合的克隆被洗滌下來,而篩選出的克隆則被保留、洗脫,然后通過一個細菌宿主進行擴增。通過改變結合及洗滌的條件,可以產生具有不同親和性的一系列多肽。此外,可溶性DNA(或RNA)競爭劑的使用,可以使對具有預定結合特性的變異體的篩選,針對某一個序列而不是另外一個。

● *連接的DNA或RNA寡核苷酸靶標
● DNA退火緩沖液(2X儲液):40mmol/L Tris—HCl,200 mmol/LNaCl,pH 8.0
● RNA折疊緩沖液(1XCM):50mmol/L二甲身酸銨(ammonium cacodylate),2mmol/LMgCl2,pH 6.5
● 2XTY培養基
● 四環素
● 鏈親和素包被的免疫管(或微孔板)(Roche Molecular Biochemicals)
● 磷酸鹽緩沖液(PBS)(10X儲液):80g/L NaCl,2g/L KCl,11.5g/L Na2HP04·7H20,2g/LKH2P04
● 1mol/L ZnCl2(用于鋅指結構域文庫的篩選)
● 凍干的脫脂牛奶(Marvel;Premier Brands UK Ltd.)
● Tween-20
● 10mg/ml超聲破碎的鮭魚精(salmon sperm)DNA
● 0.1mol/L三乙醇胺(triethanolamine)
● lmol/L Tris—HCl,pH 7.4
● 大腸桿菌F’菌株,如TGI
● M9小化瓊脂培養基:6.0g/LNa2HP04,3.0g/LK2HP04,L0g/LNh4cl,0.5g/L NaCl;高壓滅菌后加入:1.0ml/L的lmol/L MgS04, 2.0g/L 的葡萄糖,0.1ml/L的lmol/L CaCl2,1.0ml/L的1mol/L硫a-HCl,15.0g/L瓊脂
● TYE瓊脂培養基

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