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人*(cAMP)ELISA測定試劑盒操作步驟

時間:2016/10/11閱讀:737
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人*(cAMP)ELISA測定試劑盒操作步驟實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人*(cAMP)水平。用純化的人*(cAMP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入*(cAMP),再與HRP標記的*(cAMP)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的*(cAMP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人*(cAMP)活性濃度。
使用目的:
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中*(cAMP)的活性。

 

人*(cAMP)ELISA測定試劑盒操作步驟操作步驟

1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

200IU/L

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

100IU/L

4號標準品

150μl5號標準品加入150μl標準品稀釋液

50IU/L

3號標準品

150μl4號標準品加入150μl標準品稀釋液

25IU/L

2號標準品

150μl3號標準品加入150μl標準品稀釋液

12.5IU/L

1號標準品

150μl2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7.溫育:操作同3。

8.洗滌:操作同5。

9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

 

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