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elisa試劑盒實驗步驟

時間:2017/9/28閱讀:609
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1. 血清收集保存: elisa試劑盒收集不抗凝血液3-5ml,保存4℃冰箱中,在恒溫離心機中 以4℃,3500r離心10min,收集上層血清,以200ul/管分管編號凍存-80℃冰箱中。

 

 2. 包被:用包被液(CBS)稀釋八種抗原至5ug/ml,以100ul/孔加入酶標板 中,空白孔加100ul/孔3%BSA+PBS.

 

3.. 封閉:棄上清液,加封閉液(5%BSA+PBST)200ul/孔,37℃放置2h。

 

4.. 洗滌:以洗滌液洗滌5次,5min/次。 elisa試劑盒加血清樣品:將凍存血清逐級解凍至室溫,將待測血清(1:30稀釋于 1%BSA+PBST)中,以100ul/孔加入酶標本中,37℃放置2h,陰性對照孔加100ul/孔稀釋液(1%BSA+PBST).  

 

5.  洗滌:用洗滌液洗滌5次,5min/次。

 

6..  加酶標二抗:人抗IgG抗體-HRP,用1%BSA+PBST 液1:10000稀釋,100ul/孔,37℃恒溫箱溫育2h。  

 

7. 洗滌:洗滌液洗滌5次,5min/次。  

 

8.  顯色:加新鮮配制的底物(TMB:A液和B液等體積混合)100ul/孔。 10.  中止反應、比色:加50ul/孔中止液(2M H2SO4), elisa試劑盒用酶標儀測定吸收值(450nm),根據P/N確定陽性值。 1 血清特異性IgE檢測  小鼠檢測完AHR后24h內處死動物,摘眼球取血,室溫下靜置30min,4℃4000rmp/min離心10min,小心吸取上層血清,分裝-80℃保存備用。采用間4℃放 置過夜12h上。

 

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