在運用前與室溫平衡，再進行測定。在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應，即加標本和加酶聯絡物后。抗原抗體反應的結束需求有必定的溫度和時間，這一保溫進程稱為溫育（incubation），有人稱之為孵育，在ELISA試劑盒中似不恰當。
ELISA試劑盒屬固相免疫測定，抗原、抗體的聯絡只在固相表面上發生。以抗體包被的夾心法為例，參與板孔中的標本，其間的抗原并不是都有對等的和固相抗聯絡的時機，只要zui靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。
1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩，避免起泡。
2. 洗刷進程非常重要，不充分的洗刷易造成假陽性。
3. 一次加樣時間控制在5分鐘內，ELISA試劑盒如標本數量多，舉薦運用排槍加樣。
4. 請每次測定的一起做標準曲線，做復孔。
5. 如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定。
6. 在制作標準品、查看溶液工作液時，請以相應的稀釋液制作，ELISA試劑盒不能混淆。
7. 底物請避光保存。
8、ELISA試劑盒控制好每一步的操作時間。
假如對試劑準備不太留心，在實驗時將試劑從冰箱中拿出來即用，而忽略了這種做法有或許影響后邊溫育時間不行的疑問影響后邊的操作。