在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。抗原抗體反響的完結(jié)需求有必定的溫度和時(shí)刻，這一保溫進(jìn)程稱為溫育，有人稱之為孵育，在ELISA試劑盒中似不恰當(dāng)。
屬固相免疫測(cè)定，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)作。以抗體包被的夾心法為例，參加板孔中的標(biāo)本，其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結(jié)合的時(shí)機(jī)，只有zui靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個(gè)逐漸平衡的進(jìn)程，因而需經(jīng)分散才干達(dá)到反響的結(jié)尾。在這以后參加的酶符號(hào)抗體與固相抗原的結(jié)合也相同如此。這就是為什么ELISA反響總是需求必定時(shí)刻的溫育。
溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃等。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的適宜溫度。在樹(shù)立ELISA辦法作反響動(dòng)力學(xué)研討時(shí)，實(shí)驗(yàn)標(biāo)明，兩次抗原抗體反響一般在37℃經(jīng)1～2小時(shí)，產(chǎn)品的生成可達(dá)高峰。為加快反響，可進(jìn)步反響的溫度，有些實(shí)驗(yàn)在43℃進(jìn)行，但不宜選用更高的溫度。抗原抗體反響4℃更為*，在放射免疫測(cè)定中多使反響在冰箱中過(guò)夜，以構(gòu)成zui多的沉積。但因所需時(shí)刻太長(zhǎng)，在ELISA試劑盒中一般不予選用。
保溫的方法除有的ELISA試劑盒儀器附有特制的電熱塊外，一般均選用水浴，可將ELISA試劑盒板置于水浴箱中，ELISA板底應(yīng)貼著水面，使溫度敏捷平衡。為防止蒸騰，板上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此刻可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱，ELISA試劑盒應(yīng)放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱性杰出的資料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，zui終將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)則的溫度，特別是在氣溫較低的時(shí)分更應(yīng)如此。無(wú)論是水浴仍是濕盒溫育，反響板均不宜疊放，以確保各板的溫度都能敏捷平衡。室溫溫育的反響，操作時(shí)的室溫應(yīng)嚴(yán)格約束在規(guī)則的范圍內(nèi)，規(guī)范室溫溫度是指20～25℃，但具體操作時(shí)可根據(jù)說(shuō)明書的要求控制溫育。室溫溫育時(shí)，ELISA試劑盒只需平置于操作臺(tái)上即可。應(yīng)留意溫育的溫度和時(shí)刻應(yīng)按規(guī)則力求。為確保這一點(diǎn)，一個(gè)人操作時(shí)，一次不宜多于兩塊板一起測(cè)定。