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ELISA試劑盒手藝操作方法

時(shí)間:2018-1-26閱讀:188
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ELISA試劑盒手工操作有浸泡式和流水沖刷式兩種,浸泡式進(jìn)程如下:
A、吸干或甩干孔內(nèi)反響液;
B、用洗刷液過洗一遍(將洗刷液注滿板孔后,即甩去);
C、浸泡,行將洗刷液注滿板孔,放置1-2分鐘,間歇搖晃,浸泡時(shí)刻不可隨意縮短;
D、吸干孔內(nèi)液體,吸干應(yīng)*,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清洗毛巾或吸水紙上拍干;
E、重復(fù)操作c和d,洗刷3-4次(或按闡明規(guī)則)。
ELISA試劑盒操作技能的影響:
1)應(yīng)確保清潔,整個(gè)操作過程中確保酶標(biāo)板不接觸次氯酸,以上的辦法可以使“花板”降至zui低極限,然后進(jìn)步檢測的特異性,并得到更。
2)合理安排檢丈量,ELISA試劑盒避免反響板過多形成洗板等待時(shí)刻長。
3)加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板外表輕拭吸干。
4)用洗板機(jī)洗板時(shí),確保洗液注滿各孔,洗板針疏通,洗完板后在吸水紙(挑選潔凈、無或少塵的吸水資料)上輕輕拍干,避免針口有纖維蛋白或異物,這些異物在洗板的過程中易發(fā)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板”的呈現(xiàn)。
5)嚴(yán)峻溶血:以HRP為符號(hào)的ELISA試劑盒測定中,殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過氧化物酶樣活性,催化底物顯色形成假陽性。
削減ELISA試劑盒差錯(cuò)的辦法
1.做試驗(yàn)時(shí)少說話,避免唾液掉進(jìn)酶標(biāo)條中。
2.參加一抗二抗需求放入37°。
3.如果一起做多個(gè)板子,多個(gè)板子別羅一起;盡量少用排槍。
4.加樣時(shí),由低濃度向高濃度加,這樣削減跳孔的幾率。
5.勤換槍頭。
一、移液器的運(yùn)用,加樣(抗體)等需求定量的試劑時(shí)不運(yùn)用排槍,經(jīng)歷證明排槍很不,極易跳孔,不要圖廉價(jià)買等級(jí)低的tips 由于ELISA不但會(huì)擴(kuò)大被檢測的意圖蛋白,也會(huì)擴(kuò)大非特異結(jié)合的雜質(zhì)蛋白。
二、倍比稀釋樣品時(shí),稀釋倍數(shù)要小于10。
三、一切的裝跟ELISA測定試劑盒相關(guān)試劑的容器,玻璃制品的要干烤過或許運(yùn)用一次性的樹脂容器。

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