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影響ELISA試劑盒成果的原因及解決辦法

時間:2018-3-14閱讀:152
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ELISA試劑盒實驗以靈敏度較高、特異性較好的特色得到了廣泛的運用,但操作中的各個環節對實驗的檢測作用影響較大,如不留意,有可能導致顯色不全、花板等成果。我將操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給同行帶來一些啟示,進步實驗質量。
下面剖析ELISA試劑盒實驗操作中可能影響成果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 挑選試劑挑選質量的檢測試劑,嚴厲依照試劑闡明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣可能原因:1)血清或血漿標本分離欠好即進行加樣;2)手工操作中,加樣板過多形成加樣后放入孵箱前等待時刻過長;3)加完標本再加酶試劑時酶濺起孔外。解決辦法:1)標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:有必要運用含抗凝劑的血液標本搜集管,采血后有必要當即顛倒*混合5-10次,放置一段時刻后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要儲存,則置于-20℃的低溫冰箱內。2)加樣后及時放入孵箱。3)加酶試劑后用吸水紙在酶標板外表輕拭吸干。4)如果選用AT或其他全自動加樣,挑選FAME或其他后處理儀器加酶試劑。5)標本較多時,請分批操作。
3 孵育可能原因:1)孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸騰,吸附于孔壁,難于清洗*;2)孵育時刻人為延伸,導致非特異性結合緊附于反響孔周圍,難以清洗*。解決辦法:1)貼封片或加蓋;2)按闡明步驟嚴厲控制操作時刻。
4 洗板可能原因:1)選用手工洗板,孔與孔之間液體穿插。2)選用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針阻塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板作用差。3)反響板過多形成洗板等待時刻長。解決辦法:1)確保洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙上輕輕拍干;2)合理安排,或多用幾臺洗板機。
5 顯色可能原因:1)顯色劑制造后放置時刻過長或運用過期顯色劑;2)加顯色劑時濺起孔外形成液體回流。解決辦法:1)顯色劑盡量在臨用前制造,堅持不期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不必;2)加樣時堅持顯色劑不外流;3)A、B液應防止觸摸金屬器械。
6 停止可能原因如加停止液時發生較多氣泡,導致假陽性添加。所以在加停止液時應防止發生氣泡。
7 讀板如讀板時板底不清潔等。應確保酶標板清潔。
所以在整個操作過程中確保酶標板不觸摸次氯酸;盡可能完成ELISA試劑盒檢測規范自動化,有效進步檢測質量。
ELISA試劑盒在實際操作中,除了挑選試劑外,有必要嚴厲依照操作步驟進行操作,一起作好室內質控、室間質評,以謹慎的工作作風檢測每一份標本,才干確保檢測質量。現在國內已有適當數量的單位具有全自動酶標儀,這關于完成ELISA規范化檢測、進步檢測質量起到了重要作用。

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