ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特色得到了廣泛的運(yùn)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)作用影響較大，如不留意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等成果。我將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來一些啟示，進(jìn)步實(shí)驗(yàn)質(zhì)量。
下面剖析ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作中可能影響成果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：
1 挑選試劑挑選質(zhì)量的檢測(cè)試劑，嚴(yán)厲依照試劑闡明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣可能原因：1）血清或血漿標(biāo)本分離欠好即進(jìn)行加樣；2）手工操作中，加樣板過多形成加樣后放入孵箱前等待時(shí)刻過長(zhǎng)；3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺起孔外。解決辦法：1）標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：有必要運(yùn)用含抗凝劑的血液標(biāo)本搜集管，采血后有必要當(dāng)即顛倒*混合5-10次，放置一段時(shí)刻后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要儲(chǔ)存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。2)加樣后及時(shí)放入孵箱。3)加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板外表輕拭吸干。4)如果選用AT或其他全自動(dòng)加樣，挑選FAME或其他后處理儀器加酶試劑。5)標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。
3 孵育可能原因：1)孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸騰，吸附于孔壁，難于清洗*；2)孵育時(shí)刻人為延伸，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反響孔周圍，難以清洗*。解決辦法：1)貼封片或加蓋；2)按闡明步驟嚴(yán)厲控制操作時(shí)刻。
4 洗板可能原因：1)選用手工洗板，孔與孔之間液體穿插。2)選用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針阻塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板作用差。3)反響板過多形成洗板等待時(shí)刻長(zhǎng)。解決辦法：1)確保洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙上輕輕拍干；2)合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5 顯色可能原因：1)顯色劑制造后放置時(shí)刻過長(zhǎng)或運(yùn)用過期顯色劑；2)加顯色劑時(shí)濺起孔外形成液體回流。解決辦法：1)顯色劑盡量在臨用前制造，堅(jiān)持不期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不必；2)加樣時(shí)堅(jiān)持顯色劑不外流；3)A、B液應(yīng)防止觸摸金屬器械。
6 停止可能原因如加停止液時(shí)發(fā)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性添加。所以在加停止液時(shí)應(yīng)防止發(fā)生氣泡。
7 讀板如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)確保酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中確保酶標(biāo)板不觸摸次氯酸;盡可能完成ELISA試劑盒檢測(cè)規(guī)范自動(dòng)化，有效進(jìn)步檢測(cè)質(zhì)量。
ELISA試劑盒在實(shí)際操作中，除了挑選試劑外，有必要嚴(yán)厲依照操作步驟進(jìn)行操作，一起作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以謹(jǐn)慎的工作作風(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才干確保檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有適當(dāng)數(shù)量的單位具有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這關(guān)于完成ELISA規(guī)范化檢測(cè)、進(jìn)步檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。