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開心果源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒實驗原理

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                                開心果源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒說明書
概述:

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中,隨著PCR循環數的遞增,PCR產物不斷積累,熒光信號也會相應的增加,這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應進行實時的監測。本公司根據您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監測, 實現基因的相對定量、定量和定性分析。
PCR實驗方法步驟:

方法:

1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix (2mM)             

4 μl     引物1(10pM)                 

2 μl     引物2(10pM)                 

2 μl     Taq酶 (2U/μl)               

1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。

2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,在72℃ 保7min。

3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。

注意事項:

1.基礎程序;

2.擴增溫度和延伸溫度;

3.反應時間;

4.循環次數;

5.PCR 反應液的配制;

6.PCR技術的基本原理;

7.PCR的反應動力學;

8.PCR擴增產物;

9.PCR反應體系與反應條件。點擊了解更公司產品。
熒光定量PCR服務:

簡介:實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出,該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化;比較不同組織的mRNA表達差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務,全部實驗皆使用進口試劑完成,主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務要求:

(01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。

(02)請提供已知的全長基因序列。

(03)請提供盡可能詳細的背景資料:DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

(01)引物(探針)設計與合成。

(02)提取DNA/RNA,樣本逆轉錄成cDNA。

(03)進行Real Time PCR實驗,進行實驗結果分析。

(04)實驗完成后,提供完整的實驗報告(含軟件分析結果)及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標準:

  我公司根據客戶的樣品數量進行不同的收費標準。

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