植物膜蛋白酶聯免疫分析ELISA試劑盒實驗原理

本試劑盒應用間接法測定標本中植物膜蛋白水平。用純化的植物膜蛋白抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的植物膜蛋白標準品和未知濃度的植物膜蛋白待檢樣品，溫育后，加入生物素標記的抗IgG抗體，再與鏈霉親和素-HRP結合，形成免疫復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物膜蛋白呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中植物膜蛋白濃度。

試劑盒組成

1

20倍濃縮洗滌液

50ml×1瓶

9

標準品S1（60μg/L）

0.5ml×1瓶

2

鏈霉親和素-HRP

6ml×1瓶

標準品S2（40μg/L）

0.5ml×1瓶

3

酶標包被板

12孔×8條

標準品S3（20μg/L ）

0.5ml×1瓶

4

生物素標記的抗-IgG抗體

6ml×1瓶

標準品S4（10μg/L ）

0.5ml×1瓶

5

顯色劑A液

6ml×1瓶

標準品S5（5μg/L ）

0.5ml×1瓶 

6

顯色劑B液

6ml×1/瓶

10

密封袋

1個

7

終止液

6ml×1瓶

11

封板膜

3張

8

樣品稀釋液

6ml×1瓶

12

說明書

1份

植物膜蛋白酶聯免疫分析ELISA試劑盒標本要求

1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

操作步驟

1.       根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。

2.       加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品，其余各步操作相同）、標準品孔、待測樣品孔。然后在標準品孔中加入標準品50μl，在樣本反應孔中先加入待測樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl（樣品終稀釋度為5倍），蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。

3.       配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

4.       洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復4次，拍干。

5.       加生物素標記的抗-IgG抗體：每孔加入生物素標記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘

6.       洗滌：操作同4。

7.       加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

8.       洗滌：操作同4。

9.       顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.   終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.   測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

計算

  以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值待入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4．  如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先將樣本稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數（×5×n）。

5．  封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

線形范圍：

2μg/L -70μg/L

規格：

96人份/盒

植物膜蛋白酶聯免疫分析ELISA試劑盒保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月