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測(cè)定意義

H2O2是生物體內(nèi)最常見的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化產(chǎn)生，由CAT和POD等催化降解。H2O2不僅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互轉(zhuǎn)化的樞紐。一方面，H2O2可以直接或間接地氧化細(xì)胞內(nèi)核酸，蛋白質(zhì)等生物大分子，并使細(xì)胞膜遭受損害，從而加速細(xì)胞的衰老和解體；另一方面H2O2也是許多氧化應(yīng)急反應(yīng)中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。

測(cè)定原理：

H2O2與硫酸鈦生成黃色的過氧化鈦復(fù)合物，在415nm有特征吸收。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、丙酮60mL、濃鹽酸10mL、研缽和冰。

實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：

選擇抗凝的注意點(diǎn)：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后

用于測(cè)定。

分泌型白蛋白抑制因子抗體Anti-PRDX4 Antibody3 -甲基兒茶酚488-17-5說明書

2，4-二氯苯氧乙酸(除草劑)單克隆抗體Anti-PRDX4 Antibody(原貨號(hào)PB0416)松油醇98-55-5價(jià)格

尿素轉(zhuǎn)運(yùn)型糖蛋白抗體Anti-PRDX3 Antibody(原貨號(hào)PB0349)檸檬油精487-06-9品牌

雌誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄調(diào)制器抗體Anti-PRDX5 Antibodysanggenone D81422-93-7品牌

14-3-3蛋白/14-3-3 α/β/γ/δ/ε亞型抗體Anti-PRDX5 Antibody(原貨號(hào)PB0417)廣藿香酮23800-56-8說明書

2，4-二氯苯氧乙酸(除草劑)抗體Anti-PRF1 Antibody羥基芫花素20243-59-8規(guī)格

5-羥色受體1A抗體Anti-PRDX6 Antibody(原貨號(hào)PB0350)cixiophiopogon一288143-27-1說明書

5羥色抗體Anti-PRG2 Antibody芥子堿鹽7431-77-8品牌

過氧化氫（H2O2）微量法檢測(cè)試劑盒三化釕 水合物 38.0-42.0% Ru basis犬類風(fēng)濕因子(RF)免疫試劑盒因子受體抗體NAT10  乙酰轉(zhuǎn)移10抗體

氧化銀 AR,99.7%  犬抗利尿激素/血管/精氨(AVP)免疫試劑盒Ets轉(zhuǎn)錄因子家族e(cuò)ts1抗體NARG2  谷氨受體調(diào)節(jié)蛋白2抗體

氧化銀 CP,99.0% 犬抗狂犬病(RV)抗體免疫試劑盒早期B淋巴因子1抗體NARF  核纖層蛋白A識(shí)別因子抗體

化銀 AR,99.5%犬巨噬來源的趨化因子(MDC/CCL22)免疫試劑盒內(nèi)皮素受體A抗體NAPSIN A/ASP4  天冬氨蛋白ASP4抗體

硝銀 AR,99.8%犬結(jié)締組織生長因子(CTGF)免疫試劑盒因子受體抗體NAP1L2  腦特異性蛋白BPX抗體

硝銀 99.99% metals basis犬結(jié)蛋白(Des)免疫試劑盒因子受體抗體NAP1L1  核小體組裝蛋白1抗體

硝銀  ACS, ≥99.0%犬窖蛋白Caveolin-1(CAV1)免疫試劑盒早期生長應(yīng)答蛋白1抗體Nanos3  骨巢蛋白抗體

硝銀標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.1017mol/L犬降鈣素原(PCT)免疫試劑盒表皮膜蛋白1抗體NANOS2  增殖相關(guān)蛋白NANOS2抗體

硝銀標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.1000mol/L(0.1N)犬降鈣素(CALCA)免疫試劑盒內(nèi)皮受體蛋白酪氨激A抗體（腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白4）NANOGP8  干轉(zhuǎn)錄因子NANOGP8抗體

硝銀標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.01000mol/L(0.01N)犬堿性(ALP)免疫試劑盒酪氨蛋白激A4抗體Nanog  胚胎干關(guān)鍵蛋白抗體

氧化銀 99.99% metals basis犬狀腺素(T4)免疫試劑盒前列腺素E受體3抗體NALP6  富含亮氨重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體

二四氨鈀 Pd ≥43.0%犬狀旁(PTH)免疫試劑盒雌激素受體α抗體NALP4  癌/抗原58抗體

硝 99.5%（劇品）犬質(zhì)金屬蛋白9/明膠B(MMP-9/Gelatinase B)免疫試劑盒ENPP3抗體IgGNALP2/PAN1/PYPAF2  富含亮氨重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體

硝 99.999%（劇品）犬質(zhì)金屬蛋白3(MMP-3)免疫試劑盒絲裂原活化蛋白激1/2抗體NALP12  NALP12抗體

硝 98%（劇品）犬質(zhì)金屬蛋白2/明膠A(MMP-2/Gelatinase A)免疫試劑盒胚胎干RAS蛋白抗體NAIP  神經(jīng)凋亡抑制蛋白抗體

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4.        每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。