在繼續探討NCI-H460（H460）人大細胞肺癌細胞的實驗操作步驟時，我們需深入至細胞培養、處理及實驗設計的核心環節。首先，確保實驗室環境無菌且適宜細胞生長，包括調整溫度至37°C，維持5% CO?的飽和濕度環境。

     接下來，進行細胞復蘇與培養。從液氮罐中迅速取出凍存的H460細胞，于37°C水浴中快速解凍，避免冰晶形成對細胞造成損傷。隨后，將細胞懸液轉移至含有預熱培養基（如RPMI-1640加10%胎牛血清）的離心管中，低速離心去除凍存液，重懸細胞并接種至培養瓶中，置于培養箱中培養。定期觀察細胞生長狀態，適時更換新鮮培養基，確保細胞處于對數生長期。

     進入實驗階段，根據具體研究目的設計實驗方案。例如，若研究藥物對H460細胞增殖的影響，需設置不同濃度的藥物處理組及對照組。首先，將細胞以適當密度接種至培養板或培養皿中，待細胞貼壁并達到實驗所需密度后，加入含不同濃度藥物的培養基，繼續培養一定時間（如24、48或72小時）。

     隨后，利用MTT法、克隆形成實驗或流式細胞術等方法檢測細胞增殖能力、凋亡情況及細胞周期分布等生物學特性變化。通過數據分析，評估藥物對H460細胞的抑制效果及其潛在機制。

     此外，還可結合分子生物學技術，如Western Blot、qPCR等，進一步探究藥物作用下的信號通路變化，為肺癌的靶向治療提供理論依據和實驗支持。綜上所述，針對NCI-H460細胞的實驗操作步驟需嚴謹細致，結合多種技術手段，以全面揭示其在特定條件下的生物學行為及潛在治療靶點。