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進(jìn)口原裝elisa試劑盒技術(shù)中濃度的選擇條件

閱讀:159發(fā)布時(shí)間:2017-11-23

進(jìn)口原裝elisa試劑盒方法技術(shù)中,首先要確定的變異因素就是酶標(biāo)記物的工作濃度。因?yàn)槊笜?biāo)記物濃度的很小的一個(gè)變化,便會(huì)導(dǎo)致整個(gè)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生很大的波動(dòng)。另外,由于濃度過(guò)高,會(huì)使非特異性反應(yīng)增加,而濃度過(guò)低又會(huì)影響測(cè)定的敏感性。因此,在正式準(zhǔn)備試驗(yàn)前必須準(zhǔn)確滴定其工作濃度,才能完善整個(gè)實(shí)驗(yàn)。
    1. 酶標(biāo)記抗體的滴定方法是:將抗原(或抗體)物理吸附于固相載體上,然后將經(jīng)過(guò)一系列稀釋的酶標(biāo)抗體(或抗Ig抗體)與吸附在載體上的抗原(或抗體)起反應(yīng),以酶與底物的顯色反應(yīng)程度來(lái)確定酶標(biāo)記抗體的效價(jià),或稱(chēng)工作濃度。
    2. 其步驟為:先將抗原(或抗體)用0.05M PH9.6包被緩沖液稀釋為10μg/ml左右,于聚苯乙烯板孔內(nèi)加0.1ml,4℃一夜,次日以洗滌緩沖液洗滌3次。酶標(biāo)記抗體用1%BSA-PBS液依次稀釋成1:100,1:200,1:400,1:800,1:1600(根據(jù)據(jù)抗體的滴度而定),分別加入反應(yīng)孔中,每個(gè)稀釋度二孔,每孔0.1ml,37℃孵育1小時(shí)后洗滌。然后加底物液,每孔0.1ml,37℃10~30分鐘。以2M H2SO4 0.05ml終止反應(yīng)。
    3. 結(jié)果判定主要是以進(jìn)口原裝elisa試劑盒比色儀(酶標(biāo)儀)讀取各孔的OD值,并以O(shè)D為縱座標(biāo),結(jié)合物濃度為橫座標(biāo),繪制滴定曲線。由曲線上查得OD值為1.0左右,且曲線斜率zui大時(shí)的酶標(biāo)抗體稀釋度,即為該標(biāo)記物的工作濃度。
Benzoyloxypeoniflorin    苯甲酰氧化芍藥苷    20mg    72896-40-3
Benzoylmesaconine    苯甲酰新烏頭原堿    20mg    63238-67-5
Benzoylaconine    苯甲酰烏頭原堿    10mg    466-24-0
Benzoylpaeoniflorin    苯甲酰芍藥苷    20mg    38642-49-8
Benzoylhypacoitine    苯甲酰次烏頭原堿    20mg    63238-66-4
Benzoic acid    苯甲酸    20mg    65-85-0
Peimisine    貝母辛    10mg    19773-24-1
Peiminine    貝母素乙    20mg    18059-10-4
Peimine    貝母素甲    20mg    23496-41-5
進(jìn)口原裝elisa試劑盒

 


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