ELISA試劑盒酶符號抗體辦法主要有兩種：戊二醛交聯法和過碘酸鹽氧化法。
1、戊二醛交聯法戊二醛是一種雙功用團試劑，它可以使酶與蛋白質的氨基經過它而聯接。堿性磷酸一般用此法進行符號。交聯辦法分一步法、兩步法兩種。在一步法中戊二醛直接加入酶與抗體的混合物中，反響后既得酶符號抗體。
Elisa試劑盒中常用的酶一般都用此法交聯。它具有操作簡潔、有用（結合率達60%~70%）和重復性好等長處。缺陷是交聯反響是隨機的，酶與抗體交聯時分子間的份額不嚴厲，結合物的巨細也不均一，酶與酶，抗體與抗體之間也有可能交聯，影響作用。在兩步法中，先將酶與戊二醛作用，透析除掉剩余的戊二醛后，再與抗體作用而構成酶標抗體。也可先將抗體與戊二醛作用，再與酶聯合。兩步法的產品中絕大部分的酶與蛋白質是以1:1的份額結合的，較一步法的酶結合物更有助于本底的改善以進步敏感度，但其偶聯的有用率較一步法低。
2、過碘酸鹽氧化法
ELISA試劑盒本法只適用于含糖量較高的酶。辣根過氧化物酶的符號常用此法。反響時，過碘酸鈉將HRP分子外表的多糖氧化為醛基很生動，可與蛋白質上的氨基構成Schiff氏堿而結合。酶符號物按克分子份額聯合，其份額為：酶：抗體=1~2：1。此法簡潔有用，一般以為是HRPzui可取的符號辦法，但也有人以為所有試劑較為強烈，各批實驗成果不易重演。
ELISA試劑盒按以上辦法制備的酶結合物一般都混有未結合物的酶和抗體。理論上，結合物中混有的游離酶一般不影響Elisa試劑盒中zui后的酶活性測定，因經過*洗刷，游離酶可被除掉，并不影響終究的顯色。但游離的抗體則不同，它會與酶標抗體競賽相應的固相抗原，然后減少了斷合到固相上的酶標抗體的
量。因而制備的酶結合物應予純化，去除游離的酶和抗體后用于檢測，作用更好。、結合物制得后，在用作Elisa試劑盒前需要斷定其恰當的作業濃度。運用過濃的結合物，既不經濟，又可使本底增高；結合物的濃度過低，則又影響檢測的敏感性。所以有必要對結合物的濃度予以挑選。zui適的作業濃度就是指結合物稀釋至必定濃度時，能維護一個低的本底，并獲得測定的靈敏度，到達zui合適的測定條件和測定費用的節約。就酶標抗體自身而言，它的有用作業濃度是指與其相應抗原包被的載體作實驗時，能得到陽性反響的zui高稀釋度。
