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ELISA試劑盒各環(huán)節(jié)中常見問題及解決方法

閱讀:130發(fā)布時間:2017-6-5

ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的使用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對實驗的檢查作用影響較大,如不留意,有也許致使顯色不全、花板等成果。
將操作中各個環(huán)節(jié)常出現問題的因素及解決辦法總結于下,以期給同行帶來一些啟示,進步實驗質量。
下面剖析Elisa實驗操作中也許影響成果的因素,并給出相應的解決辦法一、挑選試劑
挑選質量的檢查試劑,嚴厲依照試劑闡明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
二、加樣
也許因素:
1)血清或血漿標本別離欠好即進行加樣; 2)手工操作中,加樣板過多形成加樣后放入孵箱前等待時刻過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺起孔外。
解決辦法:
1)ELISA試劑盒標本為血清:將血液先天然寄存1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:有必要使用含抗凝劑的血液標本搜集管,采血后有必要立即倒置*混合5-10次,放置一段時刻后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢查,可放在2-8℃冰箱中,若要儲存,則置于-20℃的低溫冰箱內。 2) 加樣后及時放入孵箱。3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板外表輕拭吸干。 4) 假如選用AT或別的全自動加樣,挑選FAME或別的后處理儀器加酶試劑。 5) 標本較多時,請分批操作。
三、 孵育
也許因素:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸騰,吸附于孔壁,難于清潔*; 2) 孵育時刻人為延伸,致使非特異性緊附于反響孔周圍,難以清潔*。
解決辦法:
1) 貼封片或加蓋; 2) 按闡明步驟嚴厲控制操作時刻。
四、洗板
也許因素:
1) 選用手工洗板,孔與孔之間液體穿插。 2) 選用半自動洗板機洗板時,洗液量缺乏,致使洗板不*;洗板針阻塞,抽吸不*;洗板不暢,致使洗板作用差。 3) 反響板過多形成洗板等待時刻長。
解決辦法:
1)ELISA試劑盒保證洗液注滿各孔,洗板針疏通,洗完板后在吸水紙(挑選潔凈、無或少塵的吸水資料)上輕輕拍干; 2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。


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