1、ELISA試劑盒在酶標包被板上設標準品孔10孔，在*、第二孔平分別加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，ELISA試劑盒混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔平分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔平分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔平分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為30ng/L，20ng/L ，10ng/L，5ng/L， 2.5ng/L）。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，別的各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，ELISA試劑盒然后再加待測樣品10μl（樣品畢竟稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，悄然晃動混勻。
3. ELISA試劑盒溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將20倍濃縮洗刷液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
5. 洗刷：留神揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗刷液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔參與酶標試劑50μl，空白孔在外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗刷：操作同5。
9. 顯色：每孔先參與顯色劑A50μl，再參與顯色劑B50μl，悄然轟動混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 中止：每孔加中止液50μl，中止反應（此刻藍色立轉黃色）。
11. ELISA試劑盒測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加中止液后15分鐘以內進行。
