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技術文章

ELISA試劑盒雙抗夾心法

閱讀:202發布時間:2017-6-30

1.ELISA試劑盒包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反響孔中加0.1ml,4℃ 。次日,棄去孔內溶液,用洗刷緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗刷,下同)。
2. 加樣:加必定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反響孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗刷。(一起做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標抗體:于各反響孔中,參加新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗刷。
4. 加底物液顯色:于各反響孔中參加暫時制造的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
5. 終止反響:于各反響孔中參加2M硫酸0.05ml。
6. 成果斷定:可于白色布景上,直接用肉眼調查成果:反響孔內色彩越深,陽性程度越強,陰性反響為無色或極淺,根據所呈色彩的深淺,以“+"、“-"號表明。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規則的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
ELISA試劑盒間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃;
2.次日洗刷3次;
3.加必定稀釋的待檢樣品(不知道抗體)0.1ml于上述已包被之反響孔中,置37℃孵育1小時,洗刷;
4.(一起做空白、陰性及陽性孔對照)于反響孔中,參加新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml;
5.37℃孵育35-60分鐘,洗刷;
6.ELISA試劑盒zui終一遍用DDW洗刷。
其余過程同“雙抗體夾心法"的4、5、6。


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