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ELISA試劑盒的比色測定抗體含量

閱讀:127發布時間:2017-7-10

現在常用的幾種ELISA試劑盒辦法有:測定抗體的直接法,測定抗原的雙抗體夾心法和測定抗原的競爭法等。本實驗選用直接法測定單克隆抗體效價。其主要進程為:首先將已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反響板的凹孔內,加待測抗體,保溫后洗刷以除去未的雜蛋白質,加酶標抗抗體,保溫后洗刷,加底物保溫30分鐘后,加酸或堿停止酶促反響,用目測或光電。
①抗原包被:兔抗人IgG ELISA試劑盒作為抗原,用包被液l:8000稀釋,100μL/孔參加聚苯乙烯96孔反響板中。4℃放置過夜。
②洗刷:次日傾去凹孔內的液體,洗刷液洗3次。
③關閉:加l00μL/孔關閉液,室溫放置0.5h.
④洗刷:用洗刷液洗3次。
⑤加待測樣品(一抗):將含單克降抗體的細胞培養上清在另-塊板上用PBS 接連稀釋(依照1:2或1:10),100μL /孔加到 已包被的板上,每個樣品平行做兩份,PBS 或空白培養基作為陰性對照,已知樣品作為陽性對照。加蓋37℃恒溫箱溫育 1~2h。
⑥洗刷:用洗刷液洗3次。
⑦加酶標抗抗體:兔抗鼠IgG-HRP,用關閉液l :8000稀釋,100μL/孔,加蓋37℃恒溫箱溫育1h。
⑧洗刷:用洗刷液洗5次,蒸餾水洗2次。
⑨顯色:加新鮮配制的底物溶液100μL/孔,室溫暗處放置5~30min,顯示藍色。
ELISA試劑盒停止反響、比色:加50μL/孔停止液。ELISA試劑盒色彩變黃;用酶標儀測定450nm 處各孔的吸光值,陽性反響的zui大稀釋度為待測 樣品的效價。


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