依據(jù)檢測(cè)意圖和ELISA試劑盒操作過(guò)程不同，有以下三種類型的常用辦法：3.1間接法 此法是測(cè)定抗體zui常用的辦法。將已知抗原吸附于固相載體。加人待檢標(biāo)本（含相應(yīng)抗體）與之結(jié)合。洗刷后，加人酶標(biāo)抗球蛋白抗體（酶標(biāo)抗抗體）和底物進(jìn)行測(cè)定。3.2雙抗體夾心法 此法常用于測(cè)定抗原。
將已知抗體吸附于固相載體，加人待檢標(biāo)本（含相應(yīng)抗原）與之結(jié)合。溫育后洗刷，加人酶標(biāo)板中。3.3競(jìng)爭(zhēng)法 此法可用于抗原和半抗原的定量測(cè)定，也可用于測(cè)定抗體。以測(cè)定抗原為例，將ELISA試劑盒特異性抗體吸附于固相載體。參加待測(cè)抗原和一定量的酶標(biāo)已知抗原，使二者竟?fàn)幣c固相抗體結(jié)合；通過(guò)洗刷別離，zui終結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原。
一、ELISA試劑盒酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定抗體含量（競(jìng)爭(zhēng)法）1、儀器設(shè)備酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀（Bio－550）；酶標(biāo)板 （96孔）；微量注射器。2、試劑（1）HRP符號(hào)羊抗兔Ig G（1:1 000，國(guó)產(chǎn)）；規(guī)范牛IgG；兔抗牛血清（1:256）；（2）包被液：0.05mol/L pH9.6碳酸緩沖液,4℃，保存, Na2CO3 0.15g, NaHCO3 0.293g,蒸餾水稀釋至100 mL。 （3）ELISA試劑盒稀釋液與洗刷液：0.01mol/LpH7.4 PBS--Tween--20, ４℃，保存。NaCl 8g, KH2PO4 0.2g, Na2HPO4&12H2O 2.9g, Tween20，0.5mＬ。蒸餾水加至1000mＬ。
會(huì)員1.png)