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ELISA試劑盒研究實驗條件選擇的重要性

閱讀:151發布時間:2018-1-4

ELISA試劑盒條件挑選有以下幾種方式:
(1) 固相載體的挑選:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方式可所以凹孔平板、試管、珠粒等。現在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不論何種載體,在運用前均可進行挑選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反響,調查其顯色反響是否均一性,據此判明其吸附功能是否杰出。
(2) 包被抗體(或抗原)的挑選:將抗體(或抗原)吸附在固相載體外表時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,小鼠ELISA試劑盒時刻及其蛋白量也有必定影響,一般多選用4℃ 18~24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它實驗條件相一起,調查陽性標本的OD值。挑選OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。關于多數蛋白質來說一般為1~10μg/ml。
(3) ELISA試劑盒酶符號抗體作業濃度的挑選:首先用直接ELISA法進行開始效價的滴定(見酶符號抗體部份)。然后再固定其它條件或采納“方陣法"(包被物、待檢樣品的參閱品及酶符號抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗體系里地滴定其作業濃度。


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