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試析ELIS試劑盒實驗內(nèi)標物的挑選及滿足條件

閱讀:210發(fā)布時間:2018-1-4

ELIS試劑盒將一個已知質(zhì)量,樣品中不含有雜質(zhì)的純物質(zhì),參加至待測樣品溶液中,以此純物質(zhì)的量為規(guī)范,比照測定待測組分的含量,該純物質(zhì)稱為內(nèi)標物。
內(nèi)標物需滿意下列要求:能*溶解于樣品中,且不與待測組分發(fā)作化學(xué)作用;峰位盡可能與待測組分的峰位接近,但能與待測組分*分隔(別離度R≥1.5)的純物質(zhì)。若得不到純品,有必要預(yù)先測定其準確含量,且雜質(zhì)峰不得干擾待測組分峰。
測定的成果較為準確,因為通過丈量內(nèi)標物及被測組分的峰面積的相對值來進行核算的,因而在一定程度上消除了操作條件等的改變所引起的差錯。內(nèi)標法的缺陷是操作程序較為費事,每次剖析時內(nèi)標物和試樣都要準確稱量,有時尋覓適宜的內(nèi)標物也有困難。 外標法簡潔,但進樣量要求非常準確,要嚴厲控制在與規(guī)范物相同的操作條件下進行,不然形成剖析差錯,得不到準確的丈量成果。
ELIS試劑盒內(nèi)標法是結(jié)合了峰面積歸一法和外標法的長處的一種辦法,它在參加內(nèi)標后,按峰面積歸一法的剖析辦法進行剖析,這就防止了因為進樣的一致性及樣品輕視效應(yīng)導(dǎo)致的偶然差錯,因而,它的剖析精密度也是比較高的,是氣相色譜的一種比較抱負的定量剖析辦法。它的缺點是前處理比較復(fù)雜,所花費的時間也比較長,一起有必要要有適宜的標樣及內(nèi)標物才干進行內(nèi)標法定量剖析。關(guān)于內(nèi)標法定量剖析來說,內(nèi)標物的挑選是及其重要的。
它有必要滿意如下的條件:
① 內(nèi)標物與被剖析物質(zhì)的物理化學(xué)性質(zhì)要類似;
② 內(nèi)標物應(yīng)能*溶解于被測樣品(或溶劑)中,且不與被測樣品起化學(xué)反應(yīng);
③ 內(nèi)標物的出峰方位應(yīng)該與被剖析物質(zhì)的出峰方位相近,且又不共溢出,意圖是為了防止GC的不穩(wěn)定性所形成的靈敏度的差異;
④ 挑選適宜的內(nèi)標物參加量,使得內(nèi)標物和被剖析物質(zhì)二者峰面積的匹配性大于75%,以免因為它們處在不同響應(yīng)值區(qū)域而導(dǎo)致的靈敏度偏差。
① 將已知量的內(nèi)標樣參加規(guī)范樣品,制成混合標樣,并制造一系列的已知濃度的作業(yè)標樣。混合標樣中標樣與內(nèi)標樣的摩爾比不變。
② 注入色譜柱,以(標樣峰面積/內(nèi)標樣峰面積)為響應(yīng)值。
③ 依據(jù)響應(yīng)值與作業(yè)標樣濃度之間存在的線性關(guān)系,即W=f×A,制成規(guī)范曲線。
④ 將已知量的內(nèi)標樣參加不知道樣品,注入色譜柱,得到欲測組分的響應(yīng)值。
⑤ 依據(jù)已知的系數(shù)f,即可求出欲測組分的濃度。
ELIS試劑盒操作過程中樣品和內(nèi)標是混合在一起注入色譜柱的,因而只需混合溶液中被測組分與內(nèi)標的量的比值穩(wěn)定,上樣體積的改變不會影響影響定量成果。
內(nèi)標法抵消了上樣體積,甚至活動相、檢測器的影響,因而比外標法準確。

 


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