原代細(xì)胞懸液的制備
    （1）機(jī)械法
    1）用剪刀剪碎或者用鋒利的解剖刀剁碎組織；
    2）將剪碎的組織加入勻漿器中勻漿；
    3）用吸管或注射器抽吸細(xì)胞懸液，以分散細(xì)胞；
    將細(xì)胞懸液在尼龍網(wǎng)或不銹鋼網(wǎng)上過(guò)濾，濾出的細(xì)胞懸液細(xì)胞計(jì)數(shù)后即可使用。
    （2）酶處理法  此法是實(shí)體組織分散為單個(gè)細(xì)胞的主要方法。由于不同酶對(duì)細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞間不同組分有特異消化作用，所以應(yīng)根據(jù)所用組織類(lèi)型確定使用酶的種類(lèi)。此外，乙二胺四乙酸（EDTA）能結(jié)合組織中的二價(jià)鈣離子和鎂離子，而二價(jià)鈣離子和鎂離子有維持細(xì)胞表面完整性和維持細(xì)胞間質(zhì)結(jié)構(gòu)的作用，因此，幾種酶和EDTA聯(lián)合使用有助于充分消化實(shí)體組織，提高細(xì)胞產(chǎn)出效率。下面僅介紹組織消化的一般過(guò)程，對(duì)于每種組織消化時(shí)所用的具體步驟需參考該組織細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的消化方法。
    1）將組織剪成l～2mm3左右的小塊。
    2）用胰蛋白酶或膠原酶消化組織塊，胰蛋白酶適用于消化細(xì)胞間質(zhì)較少的軟組織，如胚胎、上皮、肝、腎等組織。胰蛋白酶工作濃度一般為0．1％～0．5％。對(duì)于纖維較多的組織或較硬的癌組織常用0．25％膠原酶，膠原酶對(duì)組織中膠原蛋白類(lèi)結(jié)構(gòu)消化作用強(qiáng)，它僅對(duì)細(xì)胞間質(zhì)有消化作用而對(duì)上皮細(xì)胞影響不大。膠原酶常用劑量為0．1～0．3ug／m1。用大于組織量30～50倍的胰蛋白酶液或膠原酶液在37℃條件下消化組織，需每隔一定時(shí)間搖動(dòng)一次。消化時(shí)間的長(zhǎng)短依組織類(lèi)型而定，一般來(lái)說(shuō)，胰蛋白酶需作用20～60分鐘，膠原酶需4～48小時(shí)。在消化過(guò)程中，如發(fā)現(xiàn)組織塊已分散而失去塊的形狀，經(jīng)搖動(dòng)即可成為絮狀懸液，則可取出少量液體在顯微鏡下觀察，可見(jiàn)分散的單個(gè)細(xì)胞和少量的細(xì)胞團(tuán)，可認(rèn)為組織已消化充分。
    3）消化完畢后，將細(xì)胞懸液通過(guò)100目孔徑尼龍網(wǎng)或不銹鋼網(wǎng)濾過(guò)，以除掉未充分消化的組織。
    4）已過(guò)濾的細(xì)胞懸液經(jīng)800～1000rpm低速離心5～10分鐘后，棄上清液，加PBS液，輕輕吹打形成細(xì)胞懸液，細(xì)胞計(jì)數(shù)后即可使用。
 
    3．石蠟包埋組織的流式細(xì)胞樣品制備  外科手術(shù)獲得的新鮮實(shí)體組織，往往已進(jìn)行石蠟包埋處理，如果再制成細(xì)胞懸液進(jìn)行流式細(xì)胞分析，需將石蠟包埋組織進(jìn)行以下步驟的處理：
    （1）將石蠟包埋的組織塊切成30／xm厚的切片，盡可能除去切片中石蠟成分；
    （2）將切片置于離心管中，用二甲苯脫蠟2次，10分鐘／次；
    （3）蒸餾水洗2次后，加入lml l％胃蛋白酶溶液中（pH 1．5），37℃恒溫振蕩水浴中消化30分鐘；   
    （4）離心，所獲得的原代細(xì)胞沉淀可進(jìn)行染色和流式細(xì)胞術(shù)分析。
對(duì)照品    丹參酮 I    20mg    對(duì)照品
對(duì)照品    三七總皂苷    50mg    對(duì)照品
對(duì)照品    三七莖葉皂苷    50mg    對(duì)照品
對(duì)照品    精氨酸    100mg    對(duì)照品
對(duì)照品    丙氨酸    100mg    對(duì)照品
對(duì)照品    纈氨酸    100mg    對(duì)照品
對(duì)照品    瓜氨酸    20mg    對(duì)照品
對(duì)照品    亮氨酸    100mg    對(duì)照品
對(duì)照品    兒茶素    20mg    對(duì)照品
對(duì)照品    表兒茶素    20mg    對(duì)照品
對(duì)照品    腺苷    20mg    對(duì)照品
原代細(xì)胞