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人臍帶間充質(zhì)干細胞操作步驟

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人臍帶間充質(zhì)干細胞分離自臍帶;臍帶是哺乳類的連接胎兒和胎盤的管狀結(jié)構(gòu)。原來是由羊膜包卷著卵黃囊和尿膜的柄狀伸長部而形成的。臍帶中通過尿膜的血管即臍動脈和臍靜脈,卵黃囊的血管即臍腸系膜動脈及臍腸系膜靜脈。當(dāng)卵黃囊及其血管退化,臍動脈和臍靜脈就發(fā)達起來,在這些間隙中可以看到疏松的膠狀的間充質(zhì)。在子宮中,子宮動脈在胎盤的母體部分出的毛細血管,與胎盤的子體部胎兒毛細血管靠近,在此處母體和胎兒的血液間進行CO2和O2,代謝產(chǎn)物即代謝廢物和營養(yǎng)物質(zhì)的交換。臍動脈將胎兒來的廢物運送至胎盤,臍靜脈將O2和營養(yǎng)物質(zhì)從胎盤運送給胎兒。Z后由子宮靜脈將來自胎兒的代謝廢物運走,某種激素和抗體等也通過臍帶從母體移交給胎兒。臍帶中含有大量的干細胞,干細胞是生命的種子,它會分化成機體的各種細胞,結(jié)出各種不同的果實——血液細胞、神經(jīng)細胞、骨骼細胞等。干細胞是具有自我更新、高度增殖和多項分化潛能的細胞群體;這些細胞可以通過分裂維持自身細胞的特性和數(shù)量,又可進一步分化為各種組織細胞,從而在組織修復(fù)等方面發(fā)揮積極作用。間充質(zhì)干細胞(MSC)是一種具有高度自我更新和多向分化潛能的干細胞。在不同的誘導(dǎo)條件下,可分化為多種造血細胞以外的組織細胞,并具有造血支持、免疫調(diào)節(jié)、組織修復(fù)等作用;目前,多用于風(fēng)濕免疫疾病的治療。間充質(zhì)干細胞(MSCs)是一種具有自我更新和多向分化潛能的成體干細胞,存在于骨髓、脂肪組織、臍血及多種胎兒組織。它可分泌多種細胞因子及生長因子,促進造血干細胞(HSC)的增殖與分化。MSCs還具有免疫調(diào)節(jié)、抗炎和組織修復(fù)作用,可減輕移植物抗宿主病(GVHD)及其他移植相關(guān)并發(fā)癥。

5.培養(yǎng)基信息:

MEMα、FBS、間充質(zhì)干細胞生長添加劑、Glutamine、Penicillin、Streptomycin等

我們推薦使用人臍帶間充質(zhì)干細胞*培養(yǎng)基(產(chǎn)品貨號:HL-H204)作為體外培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)基。

二、細胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片

三、人臍帶間充質(zhì)干細胞使用方法

在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,人臍帶間充質(zhì)干細胞可傳8代左右,隨著傳代次數(shù)的增加,細胞會呈現(xiàn)老化狀態(tài),生長速度減緩,4代以內(nèi)細胞狀態(tài);建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。

客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作。

1.取出T25細胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

2.待細胞達到80%匯合時準(zhǔn)備進行傳代培養(yǎng)。

3.細胞傳代

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次;

2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml*培養(yǎng)基終止消化;

3)用吸管輕輕吹打混勻,按1:2-1:3適當(dāng)?shù)谋壤M行接種傳代,然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);

4)待細胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察;之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。

四、注意事項

1.培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2.在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。

3.傳代培養(yǎng)過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4.建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和技術(shù)部溝通;由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

5.該人臍帶間充質(zhì)干細胞只可用于科研。

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