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細胞凋亡之線粒體膜電位檢測

時間:2017/7/18閱讀:442
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細胞凋亡檢測線粒體膜電位與細胞凋亡的關(guān)系
線粒體為一雙層膜圍成的囊狀結(jié)構(gòu), 外膜與內(nèi)膜間的空腔稱為外室, 由內(nèi)膜包圍的腔稱為內(nèi)室或線粒體基質(zhì).線粒體外膜通透性較大, 分子質(zhì)量在15 ku 以下物質(zhì)可自由通過, 因此胞質(zhì)成分與線粒體外室基本相似. 線粒體內(nèi)膜通透性小, 分子質(zhì)量大于1.5 ku 物質(zhì)不易通過.但內(nèi)膜存在一些載體蛋白與通道以便運輸某些物質(zhì). 質(zhì)子泵存在于內(nèi)膜, 它將基質(zhì)內(nèi)質(zhì)子泵入外室, 從而形成橫跨線粒體內(nèi)膜的線粒體跨膜電位( mitochondrial transmembrane potential , Δψm ) .跨膜電位內(nèi)室為負, 外室為正.使一些正電荷熒光染料如rhodamine 123 、DiOC6 (3) 、JC-1 、CMX-ROS 可結(jié)合到線粒體基質(zhì)。

實驗步驟——線粒體膜電位(JC-1染色)

1.收集細胞:包括漂浮在培養(yǎng)基上的細胞;之后,PBS或培養(yǎng)基重懸送樣,正常組細胞分出200μl體積不染色;
2.離心:1000轉(zhuǎn)/分,5分鐘,棄上清;
3.染色:加入200μl JC-1染液,混勻,37℃避光孵育15分鐘,上機;
4.洗滌:加入500μl 洗液;
5.離心:1000轉(zhuǎn)/分,5分鐘,棄上清,加入200μl 洗液,混勻,上機
JC-1做線粒體膜電位的優(yōu)缺點
JC-1比Rhodamine 123更靈敏,比DIOC6(3)特異性更高;但細胞凋亡檢測JC-1占用了紅、綠熒光通道,很難與其它染料共用,而且對溫度、pH敏感。
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細胞凋亡檢測                        

 

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