細(xì)胞培養(yǎng)自噬作為一項(xiàng)真核生物*的生理現(xiàn)象, 開(kāi)始應(yīng)用于不同的領(lǐng)域。澳大利亞學(xué)者通過(guò)對(duì)果蠅自噬信號(hào)通路中上下游基因的敲除, 確定了自噬在果蠅程序性清除中腸中的重要作用。自噬與癌癥之間的一直是眾多學(xué)者關(guān)注的焦點(diǎn), 美國(guó)學(xué)者通過(guò)在小鼠中突變自噬上游調(diào)節(jié)基因beclin1, 證實(shí)當(dāng) beclin1為雜合子時(shí), 小鼠體內(nèi)的腫瘤增長(zhǎng)更迅速, 過(guò)表達(dá)beclin1則會(huì)抑制腫瘤的生長(zhǎng)。

這些研究闡明了自噬的新功能, 開(kāi)辟了新的研究方向, 也給了我們將自噬運(yùn)用于低溫脅迫研究的靈感。本文對(duì)自噬的特異基因LC3進(jìn)行標(biāo)記, 通過(guò)檢測(cè)自噬小體*的LC3II自噬熒光點(diǎn)監(jiān)測(cè)自噬出現(xiàn)的時(shí)間與強(qiáng)度。隨后, 將HeLa細(xì)胞放置于不同溫度的低溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng), 模擬自然界中的急性冷刺激。

在這種急性冷刺激下, HeLa細(xì)胞出現(xiàn)了不同程度的自噬熒光點(diǎn)聚集, 證實(shí)了低溫可以誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生自噬, 且溫度越低, 出現(xiàn)自噬的時(shí)間越早, 出現(xiàn)的自噬程度越強(qiáng)。結(jié)合細(xì)胞低溫下的存活率結(jié)果, 發(fā)現(xiàn)細(xì)胞自噬狀態(tài)與細(xì)胞存活狀態(tài)之間密切相關(guān), 在低溫脅迫下, 細(xì)胞先啟動(dòng)自噬, 當(dāng)細(xì)胞內(nèi)的自噬慢慢減弱并開(kāi)始消失時(shí), 細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)死亡。

為了確定在低溫脅迫下, 細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)自噬所擔(dān)當(dāng)?shù)慕巧? 使用 Bafilomycin A1阻斷了細(xì)胞自噬。自噬阻斷后, 低溫脅迫下的細(xì)胞提前開(kāi)始死亡, 且細(xì)胞的存活率較未阻斷的細(xì)胞出現(xiàn)顯著性下調(diào)。這證明了細(xì)胞受到急性冷刺激時(shí), 自噬可以保護(hù)細(xì)胞, 維持細(xì)胞的存活, 而這種保護(hù)開(kāi)始減弱時(shí), 細(xì)胞便開(kāi)始死亡。
Jatrorrhizine Hydrochloride    20mg    鹽酸藥根堿    6681-15-8
Jolkinolide B    20mg    巖大戟內(nèi)酯B    37905-08-1
Jujuboside A    20mg    酸棗仁皂苷A    55466-04-1
Jujuboside B    20mg    酸棗仁皂苷B    55466-05-2
Jujuboside D    20mg    酸棗仁皂苷D    194851-84-8
細(xì)胞培養(yǎng)