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上海莼試生物技術有限公司
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細胞凋亡檢測在生物化學上的應用

時間:2018-4-20閱讀:169
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在生物化學上,多數細胞凋亡檢測的過程中,內源性核酸內切酶活化,活性增加。核DNA隨機地在核小體的連接部位被酶切斷,降解為180-200bp或它的整倍數的各種片斷。如果對核DNA進行瓊脂糖電泳,可顯示以180-200bp為基數的DNA ladder(梯狀帶紋)的特征。
許多同學對細胞消化做了許多研究,得出了很多有價值的經驗,也見到很多人的困惑。其實細胞培養,尤其是細胞系的培養,就消化而言,不是太難,做得多了,善于總結經驗,就能把細胞越養越好。一般的程序步驟,細節操作,我這里就不講了,只講一些基本操作背后的知識,如果不對之處,歡迎指正,一起討論:
1、其實絕大部分細胞消化的時候是只要用*潤洗一遍即可,吸去*后,殘留的那些無法計算體積的附著在細胞表面的微量*在37度一般不到2min足夠消化細胞(絕大部分1min不到)。對于這些細胞原則上不要用*孵育細胞,連續這樣傳代,對細胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去,*潤洗吸去,然后37度消化。
2、什么算是消化好了呢?不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了,一般你肉眼觀察貼壁細胞層,只要能移動了,多半呈沙壯移動,其實已經可以了,很多人喜歡把細胞消化或者吹打成*分離細胞,這是沒有必要的。一般能移動了,說明細胞與培養基質材料的附著已經消失了,細胞之間的附著也已經消失了,細胞已經獨立分布了(雖然沒有呈現很廣的離散分布)。這個時候應該停止消化,不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好,間隙很大,才停止。細胞就是*成單個細胞懸液,之后在貼壁的過程中仍然會聚集,這個是貼壁培養的細胞,尤其是腫瘤細胞的一個特性,無論死活的細胞都是如此,你可以嘗試,準備的單個細胞懸液,貼壁后觀察細胞,仍然是幾個幾個細胞聚集在一起。一些懸浮培養細胞也是如此,容易聚集,不要去嘗試過幾個小時就拿出來吹打成單細胞懸液
細胞膜是一選擇性的生物膜,一般的生物染料如PI等不能穿過質膜。當細胞壞死時,質膜不完整,PI就進入細胞內部,它可嵌入到DNA或RNA中,使壞死細胞著色,細胞凋亡檢測和活細胞不著色。而一些活細胞染料由于為親脂性物質,可跨膜進入活細胞,因而可進行活細胞染色。Hoechst33342是一種活性熒光染料且毒性較弱,它是雙苯并咪唑的一種衍生物。與DNA特異結合(主要結合于A-T)堿基區),顯示凋亡細胞和活細胞。凡是看到有凋亡小體的細胞都是凋亡細胞。
100031-200304    含量測定    100mg    *
100032-        50mg    *
100033-200607    含量測定    100mg    *
010034-200503    含量測定     100mg     枸櫞酸氯米芬
        50mg    甲磺酸雙氫麥角毒堿
100037-200306    含量測定    50mg    *
100038-200803    檢查用    100mg    鄰甲苯磺酰胺
100039-200602    檢查用    100mg    6-巰基嘌呤
100042-200002    檢查用    50mg    2-氯-4-硝基苯胺
100043-199701    檢查用    50mg    *
        50mg    馬來酸*
細胞凋亡檢測

 

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