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分析細胞周期同步化

時間:2017/6/6閱讀:479
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(一)ATCC細胞自然同步化

1.多核體如粘菌只進行核分裂,而不發(fā)生胞質(zhì)分裂,形成多核體。數(shù)量眾多的核處于同一細胞質(zhì)中,進行同步化分裂,使細胞核達108,體積達5~6cm。瘧原蟲也具有類似的情況。 2.某些水生動物的受精卵如海膽卵可以同時授精,Z初的3次細胞分裂是同步的,再如大量海參卵受精后,前9次細胞分裂都是同步化進行的。 3.增殖抑制解除后的同步分裂如真菌的休眠孢子移入適宜環(huán)境后,它們一起發(fā)芽,同步分裂。

(二)人工同步化

1.選擇同步化

1)有絲分裂選擇法:使單層培養(yǎng)的細胞處于對數(shù)增殖期,此時分裂活躍,MI高。有絲分裂細胞變圓隆起,與培養(yǎng)皿的附著性低,此時輕輕振蕩,M期細胞脫離器壁,懸浮于培養(yǎng)液中,收集培養(yǎng)液,再加入新鮮培養(yǎng)液,依法繼續(xù)收集,則可獲得一定數(shù)量的中期細胞。其優(yōu)點是,操作簡單,同步化程度高,細胞不受藥物傷害,缺點是獲得的細胞數(shù)量較少。(分裂細胞約占1%~2%) 2)細胞沉降分離法:不同時期的細胞體積不同,而細胞在給定離心場中沉降的速度與其半徑的平方成正比,因此可用離心的方法分離。ATCC細胞其優(yōu)點是可用于任何懸浮培養(yǎng)的細胞,缺點是同步化程度較低。

2.誘導(dǎo)同步化

1)DNA合成陰斷法:選用DNA合成的抑制劑,可逆地抑制DNA合成,而不影響其他時期細胞的運轉(zhuǎn),Z終可將細胞群阻斷在S期或G/S交界處。5-氟脫氧尿嘧啶、羥基脲、阿糖胞苷、氨甲蝶呤、高濃度ADR、GDR和TDR,均可抑制DNA合成使細胞同步化。其中高濃度TDR對S期細胞的毒性較小,因此常用TDR雙阻斷法誘導(dǎo)細胞同步化:在細胞處于對數(shù)生長期的培養(yǎng)基中加入過量TDR,(Hela,2mol/L;CHO,7.5mol/L)。S期細胞被抑制,其它細胞繼續(xù)運轉(zhuǎn),Z后停在G1/S交界處。移去TDR。洗滌細胞并加入新鮮培養(yǎng)液、細胞又開始分裂。當釋放時間大于TS時,所有細胞均脫離S期,再次加入過量TDR,細胞繼續(xù)運轉(zhuǎn)至G1/S交界處,被過量TDR抑制而停止。優(yōu)點是同步化程度高,適用于任何培養(yǎng)體系。可將幾乎所有的細胞同步化。缺點是產(chǎn)生非均衡生長,個別細胞體積增大。

2)中期阻斷法:ATCC細胞利用破壞微管的藥物將細胞阻斷在中期,常用的藥物有秋水仙素和秋水仙酰胺,后者毒性較少。優(yōu)點是無非均衡生長現(xiàn)象,缺點是可逆性較差。

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