當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>技術(shù)文章>>如何選擇高品質(zhì)的原代細(xì)胞做實驗?
原代細(xì)胞越來越受廣大科研者的喜愛,但細(xì)胞的生命力不像人們想象中那么強大,在培養(yǎng)復(fù)蘇等過程中稍有不慎就不可能導(dǎo)致它的死亡。與此同時越來越多關(guān)于細(xì)胞的實驗客戶會選用骨髓瘤細(xì)胞。原因主要有以下兩點,同時選擇合適的骨髓瘤細(xì)胞必須滿足四個條件:
一、骨髓瘤細(xì)胞具有無限分裂能力,由于該細(xì)胞并非高度分化細(xì)胞,因此分裂能力較強,而其它腫瘤細(xì)胞分裂能力較弱,因此多在制備單克隆抗體時與B淋巴細(xì)胞融合,使單克隆抗體迅速大量增殖。
二、同時骨髓瘤細(xì)胞能產(chǎn)生并分泌大量的免疫球蛋白,這樣的瘤細(xì)胞融合后,可能影響或降低所分泌抗體的滴度,所以必須選育出非分泌免疫球蛋白缺陷型的骨髓瘤細(xì)胞。
三、選擇骨髓瘤細(xì)胞的條件:①該瘤細(xì)胞系的來源應(yīng)與制備脾細(xì)胞小鼠為同一品系,以便兩者的組織相容性抗原一致;②骨髓瘤細(xì)胞必須是靜息狀態(tài),不產(chǎn)生γ球蛋白或不分泌到細(xì)胞外;③骨髓瘤細(xì)胞生長需要一個較高的細(xì)胞密度,106個細(xì)胞/ml;④生長速度快,繁殖時間短。
目前常用的Balb/c小鼠產(chǎn)生的骨髓瘤細(xì)胞株有:①S194/5XXO?BU?1;②SP2/0—Ag14(簡稱SP2);③P2—X? ?—Ag8?6?5?3(簡稱653);④FO
以653Z為常用,它是由礦物油4-甲基-15烷(Pristane,降植烷)誘發(fā)出來的一種漿細(xì)胞瘤(Minerol Oil plasmacy toma,MOPC)并經(jīng)過培育形成一株8-氮鳥嘌呤有抵抗力的亞系。
原代細(xì)胞一般由有關(guān)單位直接引入,保存于-195℃液氮罐中,試驗時復(fù)蘇、增殖、傳代即可。
由于骨髓瘤細(xì)胞是半貼壁狀態(tài),很容易脫落,因此不需要胰酶處理。為了防止出現(xiàn)返祖現(xiàn)象,在融合前,可將培養(yǎng)基內(nèi)加入15μg/ml 8-氮鳥嘌呤。取約1×107~6×107對數(shù)生長期(即培養(yǎng)15h~20h)的骨髓瘤細(xì)胞,在室溫離心(400g)10min,沉淀以2.5%FCS—1640液再懸浮并計數(shù)。
鑒別 甘氨酸 對照品 110735-200102 200mg
含量測定 芍藥苷 對照品 110736-200526 20mg
含量測定 異補骨脂素 對照品 110738-200511 20mg
含量測定 補骨脂素 對照品 110739-200511 20mg
含量測定 秦皮甲素 對照品 110740-200406 20mg
含量測定 秦皮乙素 對照品 110741-200506 20mg
含量測定 熊果酸 對照品 110742-200516 20mg
原代細(xì)胞
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