磷脂酰絲氨酸正常位于細胞膜的內(nèi)側(cè)，但在細胞凋亡的早期，PS可從細胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細胞膜的表面，暴露在細胞外環(huán)境中。Annexin-V是一種分子量為35~36KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力特異性結(jié)合。將Annexin-V進行熒光素(FITC、PE)或biotin標記，以標記了的Annexin-V作為熒光探針，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發(fā)生。

碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但在凋亡中晚期的細胞和死細胞，PI能夠透過細胞膜而使細胞核紅染。因此將Annexin-V與PI匹配使用，就可以將凋亡早晚期的細胞以及死細胞區(qū)分開來。

方法

1 懸浮細胞的染色：將正常培養(yǎng)和誘導凋亡的懸浮細胞(0.5~1×106)用PBS洗2次，加入100ul Binding Buffer和FITC標記的Annexin-V(20ug/ml)10ul，室溫避光30min，再加入PI(50ug/ml)5ul，避光反應5min后，加入400ul Binding Buffer，立即用FACScan進行流式細胞術(shù)定量檢測(一般不超過1h)， 同時以不加AnnexinV-FITC及PI的一管作為陰性對照。

2 貼壁培養(yǎng)的細胞染色：先用0.25%的胰酶消化，洗滌、染色和分析同懸浮細胞。

3 爬片細胞染色：同上，Z后用熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡進行觀察。

注意事項

1. 整個操作動作要盡量輕柔，勿用力吹打細胞。

2. 操作時注意避光，反應完畢后盡快在一小時內(nèi)檢測。