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人正常組織細(xì)胞培養(yǎng)過程常見問題

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1.為什么培養(yǎng)的人正常組織細(xì)胞要及時(shí)傳代?
    答:體外培養(yǎng)的細(xì)胞大多具有生長(zhǎng)接觸抑制的特性,也就是說(shuō)當(dāng)一個(gè)細(xì)胞被其他細(xì)胞包圍的時(shí)候,它就會(huì)停止生長(zhǎng),及時(shí)傳代后,細(xì)胞的生長(zhǎng)得以繼續(xù)。
2.培養(yǎng)液pH下降很快可能原因有哪些?其解決辦法是什么?
    答:通常細(xì)胞生長(zhǎng)得非??鞎r(shí),pH值通常下降得很快。此時(shí)可以及時(shí)傳代、提高傳代比例或降低血清量等方法進(jìn)行解決。此外,培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊、NaHCO3 緩沖系統(tǒng)緩沖能力不夠、培養(yǎng)液中鹽濃度不正確、細(xì)菌、酵母或真菌污染等也能導(dǎo)致pH值通常下降得很快。
       (1)按培養(yǎng)液中NaHCO3 濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2 濃度,2.0g/L 到3.7g/L 濃度NaHCO3對(duì)應(yīng)CO2濃度為5%到10%。
       (2)改用不依賴CO2培養(yǎng)液。
       (3)松開瓶蓋1/4 圈。加HEPES 緩沖液至10 到25mM終濃度。
       (4)在CO2 培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle′s 鹽配制的培養(yǎng)液,在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hanks 鹽配制的培養(yǎng)液。
       (5)如果是污染造成的則丟棄培養(yǎng)物或用抗生素除菌。
3.培養(yǎng)液pH對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響?
    答:由于大多數(shù)細(xì)胞適宜pH為7.2-7.4,偏離此范圍可能對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)將產(chǎn)生有害的影響。但各種細(xì)胞對(duì)pH的要求也不*相同,原代培養(yǎng)細(xì)胞一般對(duì)pH變動(dòng)耐受差,無(wú)限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。但總體來(lái)說(shuō),細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些。在配制培養(yǎng)用液時(shí),需要注意一點(diǎn):培新配的培養(yǎng)基在經(jīng)過0.10um或0.22um濾膜過濾時(shí),溶液的pH還會(huì)向上浮動(dòng)0.2左右。
4.購(gòu)買之細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會(huì)發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形?
    答:研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少,大都是因?yàn)殡x心過程操作上的失誤,造成細(xì)胞的物理性損傷,以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細(xì)胞生長(zhǎng)隔夜后再更換培養(yǎng)基即可。但對(duì)于DMSO敏感的細(xì)胞,還是復(fù)蘇細(xì)胞時(shí),用離心去除DMSO比較好。
5.購(gòu)買之細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?
    答:研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,原因比較復(fù)雜,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳;血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳;解凍過程錯(cuò)誤;冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心;懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞;培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤;細(xì)胞置于–80 ℃太久等。建議嚴(yán)格參照ATCC或ECACC的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行人正常組織細(xì)胞復(fù)蘇、凍存等工作。
1,4-α-D-葡聚糖麥芽水解酶    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    英文名稱:    β-Amylase    含量:    BR,4000u/g
粘膠質(zhì)酶    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    英文名稱:    Pectinase    含量:    生物技術(shù)級(jí),30u/mg
果膠酶Y-23    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    英文名稱:    Pectolyase Y-23    含量:    生物技術(shù)級(jí),17u/mg
菠蘿酶    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    英文名稱:    Bromelaine    含量:    BR,50u/mg
番木瓜酶    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    英文名稱:    Papain    含量:    BR,500u/mg
酸性蛋白酶    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    英文名稱:    Acidic Protease    含量:    生物技術(shù)級(jí),1u/mg
人正常組織細(xì)胞

 

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