羅猴胎腎細(xì)胞；MA104在進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)的時(shí)候，胰蛋白酶作用的時(shí)間是在1～3分鐘，由于我有好幾個(gè)培養(yǎng)瓶（4個(gè)以上）的細(xì)胞都需要進(jìn)行傳代操作，那么就胰酶消化這一步而言，我是該一個(gè)培養(yǎng)瓶一個(gè)培養(yǎng)瓶這么分開做，還是可以幾個(gè)同時(shí)做呢？同時(shí)做我怕后來操作的培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞消化過度啊！一個(gè)一個(gè)的做會(huì)不會(huì)又太費(fèi)時(shí)呢？
培養(yǎng)基 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
生長特性 貼壁生長
1、一個(gè)一個(gè)做！防止污染，和消化細(xì)胞時(shí)間的不均勻。
2、原則上，為了避免細(xì)胞系之間的污染，應(yīng)該一個(gè)一個(gè)的做。但是如果你能保證無菌操作的原則，MA104羅猴胎腎細(xì)胞也能把握好各種貼壁細(xì)胞系消化的時(shí)間，是可以同時(shí)做，這樣效率高。建議你剛開始一個(gè)一個(gè)的做，熟練以后根據(jù)具體情況決定如何做。
3、4個(gè)可以同時(shí)做，時(shí)間到了用移液槍給4個(gè)瓶加含血清的培養(yǎng)基終止就行。
4、新手的話強(qiáng)烈建議一個(gè)一個(gè)處理細(xì)胞，特別是消化，除非你養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)消化都不敏感，不然很容易消化過度或者不到位。另外同時(shí)處理多個(gè)細(xì)胞容易出現(xiàn)細(xì)胞間交叉污染，一旦污染基本沒救，比細(xì)菌污染還要麻煩。
5、剛開始還是一個(gè)一個(gè)來，羅猴胎腎細(xì)胞；MA104消化的時(shí)間與細(xì)胞的來源有很大關(guān)系，貼壁性強(qiáng)的細(xì)胞，需要消化的時(shí)間較長。一般除了貼壁性強(qiáng)的癌細(xì)胞外，細(xì)胞消化時(shí)間1-3min，還有胰蛋白酶的濃度有關(guān)系，濃度高的消化時(shí)間要短一些，不然會(huì)消化過了，對(duì)于細(xì)胞的生長不好。你可以在分散打入胰蛋白酶時(shí)，輕晃培養(yǎng)瓶，在顯微鏡下看見細(xì)胞開始變亮，皺縮，卷邊的時(shí)候就加入培養(yǎng)液或者血清終止消化。
失敗的關(guān)鍵原因還是細(xì)胞復(fù)蘇的時(shí)候沒有迅速解凍的緣故，Z后一次成功是因?yàn)樽⒁獾竭@個(gè)問題。細(xì)胞的復(fù)蘇及凍存遵循慢凍速融原則，如果MA104羅猴胎腎細(xì)胞取出后沒有在盡可能短的時(shí)間里解凍的話細(xì)胞內(nèi)部會(huì)產(chǎn)生很多冰晶對(duì)細(xì)胞就有致命的損失了。另外，羅猴胎腎細(xì)胞；MA104的確應(yīng)該是在液氮條件下保存，如果液氮可以保存1-2年的細(xì)胞，放-80度保存恐怕不到三個(gè)月就不行了，并且狀態(tài)會(huì)很差。