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人微血管內(nèi)皮細(xì)胞株使用步驟

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人微血管內(nèi)皮細(xì)胞株細(xì)胞特性

1) 來源:血管

2) 形態(tài):內(nèi)皮細(xì)胞,貼壁生長

3) 含量:>1x106 個/mL

4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

5) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

細(xì)胞接受后的處理:

1) 收到細(xì)胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。

2) 請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。

4) 如果細(xì)胞長滿(90%以上)請及時進行細(xì)胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。

5) 接到細(xì)胞次日,請檢查細(xì)胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請及時告知我們?nèi)〉谩?/p>

 

人微血管內(nèi)皮細(xì)胞株細(xì)胞用途:僅供科研使用。

                    

本公司的細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程,供參考

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 內(nèi)皮培養(yǎng)基(ECM: Sciencell 1001);胎牛血清,5%;內(nèi)皮生長因子1%;1ug/mL氫化可地松。違禁字:氫化可地松,地替代的

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。

3. 輕輕吹打后吸出,移入15ml離心管中,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,先要消化處理并進行細(xì)胞計數(shù)。消化方法按照細(xì)胞傳代方法的1-3步驟進行,后的重懸液使用血清。懸浮細(xì)胞直接計數(shù)后離心,用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。

人微血管內(nèi)皮細(xì)胞株注意事項:

1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即告知我們。

2. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

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