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植物三磷酸腺苷(ATP)ELISA試劑盒技術參數

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植物三磷酸腺苷(ATP)ELISA試劑盒實驗原理:

   本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中植物三磷酸腺苷(ATP)水平。用純化的植物三磷酸腺苷(ATP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入三磷酸腺苷(ATP),再與HRP標記的三磷酸腺苷(ATP)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的三磷酸腺苷(ATP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中植物三磷酸腺苷(ATP)濃度。

試劑盒組成:

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

保存

說明書

1份

1份

 

封板膜

2片(48)

2片(96)

 

密封袋

1個

1個

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

標準品:225 ng/L

0.5ml×1瓶

0.5ml×1瓶

2-8℃保存

標準品稀釋液

1.5ml×1瓶

1.5ml×1瓶

2-8℃保存

酶標試劑

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

樣品稀釋液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

顯色劑A液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

顯色劑B液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

終止液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

濃縮洗滌液

(20ml×20倍)×1瓶

(20ml×30倍)×1瓶

2-8℃保存

植物三磷酸腺苷(ATP)ELISA試劑盒標本要求: 

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

 

操作步驟:

標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為150 ng/L,100 ng/L,50 ng/L,25 ng/L,12.5 ng/L)。
加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
溫育:操作同3。
洗滌:操作同5。
顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 
終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
 

注意事項:

試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
底物請避光保存。
嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
本試劑不同批號組分不得混用。
10. 植物三磷酸腺苷(ATP)ELISA試劑盒如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

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