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豬鉤端螺旋體抗體IgG (Lep-IgG)ELISA試劑盒技術參數

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豬鉤端螺旋體抗體IgG (Lep-IgG)ELISA試劑盒使用說明書

本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于檢測豬血清,血漿中豬鉤端螺旋體抗體IgG (Lep-IgG)水平。

實驗原理:

  本試劑盒采用雙抗原夾心酶聯免疫法(ELISA)測定標本中豬鉤端螺旋體抗體IgG (Lep-IgG)。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中鉤端螺旋體抗體IgG (Lep-IgG)相結合,經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的抗原結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成Z終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中豬鉤端螺旋體抗體IgG (Lep-IgG)的存在與否。

 

試劑盒組成:

試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存

說明書 1份 1份  

封板膜 2片(48) 2片(96)  

密封袋 1個 1個  

酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存

陰性對照 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存

陽性對照 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存

酶標試劑 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

樣品稀釋液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

顯色劑A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

顯色劑B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

濃縮洗滌液 (20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 2-8℃保存

 

樣本處理及要求:

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。

2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。

3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

 

豬鉤端螺旋體抗體IgG (Lep-IgG)ELISA試劑盒操作步驟:

?編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)

?加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,

?溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

?配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用

?洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

?加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

?溫育:操作同3。

?洗滌:操作同5。

?顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘

?終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

?測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

 

結果判定:

  試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10

  臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

  陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為人鉤端螺旋體抗體IgG (Lep-IgG)陰性

  陽性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為人鉤端螺旋體抗體IgG (Lep-IgG)陽性

注意事項

1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。

2.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

3.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

?封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5.底物請避光保存。

6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm

7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。

 

豬鉤端螺旋體抗體IgG (Lep-IgG)ELISA試劑盒保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6個月

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