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上海莼試生物技術有限公司
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如何對原代細胞組分進行分級分離

時間:2017-9-27閱讀:188
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離心是原代細胞分級分離中Z常用的技術之一,它們單獨使用,或與其他方法結合。例如,對于高爾基體或過氧化物酶體,大部分操作都要求高速的密度梯度離心。然而,O’Hara Noonan也指出,超速離心也有一些缺點,包括超速離心機是高價的儀器,有些實驗室無法接觸到。另外,密度梯度難以傾倒是出了名的,其結果是技術依賴的。

當然,其他的許多組分也可以只利用試劑和臺式儀器來富集。供應商開發(fā)出一些試劑盒,能方便快捷地帶來高度富集的細胞組分。爾全新設計的Mem-PER Plus試劑盒,能在一小時之內富集完整的膜相關蛋白。

據(jù)sigma-aldrich的產(chǎn)品專家Michael Moehlenbrock介紹,這類試劑盒的原理在很大程度上是類似的。它們往往使用低滲緩沖液給細胞膜帶來壓力,然后用等滲的提取緩沖液(帶或不帶還原劑和蛋白酶抑制劑)來維持感興趣的細胞器。有時也需要機械裂解或去污劑裂解。“各個不同供應商在細胞分級分離試劑盒的設計上都是一致的,而不同細胞組分的差異在于緩沖液組成、裂解試劑和離心速度,”Moehlenbrock說。

此類試劑盒的價值并不在于某些秘密試劑,而在于QC系統(tǒng)的一致性和重復性。“細胞分級分離的方法已經(jīng)過充分鑒定,其操作步驟適用于大部分應用,”Moehlenbrock說。“商業(yè)化試劑盒為Z終用戶帶來了簡便和效率,同時提供了*的安全性。”

通過改變穿插在離心步驟之間的緩沖液的去污劑組分,研究人員可分離不止一個組分。例如,市場上許多試劑盒可收集原代細胞核和胞漿蛋白。其他試劑盒也帶來了三個或四個不同的組分。Cell Signaling Technology的Cell Fractionation Kit產(chǎn)生了細胞質、細胞膜/細胞器以及細胞核/細胞骨架組分,而QIAGEN的Qproteome Cell Compartment Kit分離出細胞質、細胞膜、細胞核和細胞骨架組分。
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原代細胞

 

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