原代細(xì)胞構(gòu)建重組質(zhì)粒, 采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR)法、Western blot、MTT法、流式細(xì)胞術(shù)(FCM)分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染后K562細(xì)胞中 bcr/abl融合基因、bcr/abl融合蛋白的表達(dá)水平、細(xì)胞生長(zhǎng)增殖變化及細(xì)胞凋亡率, 探索該基因的沉默表達(dá)對(duì)K562細(xì)胞的抑制作用。結(jié)果表明, 該實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建出能明顯下調(diào)Shp2基因及其蛋白表達(dá)的重組質(zhì)粒, 轉(zhuǎn)染K562細(xì)胞后, 其bcr/abl融合基因及融合蛋白水平均明顯降低、K562細(xì)胞增殖活力被抑制(P<0.05)、細(xì)胞凋亡水平上升(P<0.05)。與對(duì)照組相比, 其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示, 重組質(zhì)粒可顯著降低bcr/abl基因及蛋白的表達(dá), 抑制K562細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng), 表明在細(xì)胞水平沉默 Shp2有可能成為治療慢性粒細(xì)胞白血病的有效靶點(diǎn)。

慢性粒細(xì)胞白血病(chronic myeloid leukemia, CML)是Z常見的骨髓增生性疾病, 占成人白血病診斷病例的15%。其發(fā)病機(jī)制是t(9; 22)(q34; ql1)易位形成Ph染色體, 表達(dá)bcr/abl融合基因并翻譯成具有酪氨酸激酶活性的bcr/abl融合蛋白, 該蛋白可激活細(xì)胞內(nèi)多種信號(hào)傳導(dǎo)通路, 導(dǎo)致白細(xì)胞在體內(nèi)惡性增殖。目前, CML的治療方法主要是采用酪氨酸激酶抑制劑來針對(duì)bcr/abl進(jìn)行靶向治療, 但有部分病人對(duì)此類藥物可產(chǎn)生耐藥。

因此, 探索基于其他機(jī)制的治療方法具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。近年研究發(fā)現(xiàn), Shp2基因已被確認(rèn)為與人類白血病及其它腫瘤相關(guān)的蛋白酪氨酸磷酸酶細(xì)胞原癌基因。而作為原癌基因, 其表達(dá)量在CML細(xì)胞中顯著升高。同時(shí)研究也證實(shí), 慢性粒細(xì)胞白血病致癌基因bcr/abl 轉(zhuǎn)化造血細(xì)胞需要Shp2介導(dǎo)。因此, 本實(shí)驗(yàn)擬通過 RNA干擾技術(shù)沉默Shp2基因, 原代細(xì)胞探索該基因的沉默表達(dá)對(duì)慢性髓細(xì)胞白血病K562細(xì)胞株的抑制效應(yīng), 旨在為尋找治療CML的有效靶點(diǎn)奠定基礎(chǔ)。
HPLC≥98%    Pectolinarin    大薊苷（柳穿魚葉苷）    20mg/支
HPLC≥98%    2"-O-galloylhyperin    2”-O-沒食子酰基金絲桃苷    20mg/支
HPLC≥98%    9-methoxycamptothecine    9-甲氧基喜樹堿    20mg/支
HPLC≥98%    Lycorine chloride    鹽酸石蒜堿    20mg/支
HPLC≥98%    Glabridin    光甘草定    20mg/支
HPLC≥98%    aurantio-obtusin    橙黃決明素    20mg/支
HPLC≥98%    Nuciferine    荷葉堿    20mg/支
HPLC≥99%    Biochanin A    鷹嘴豆芽素A    20mg/支
HPLC≥99%    10-hydroxycamptothecin    10-羥基喜樹堿    20mg/支
≥99%    Theobromine    可可堿    20mg/支
95%    D-Pinitol    D-松醇    20mg/支
HPLC≥98%    Hederagenin    常春藤皂苷元    20mg/支
原代細(xì)胞