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人正常組織細胞轉化如何調控?

時間:2018-2-9閱讀:185
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人正常組織細胞該研究旨在探討Hedgehog-Gli1(HH)信號在腎小管上皮細胞表型轉化(epithelial-mes-enchymal transition, EMT)和膠原累積中的作用及與TGF-β1信號的對話機制。該實驗通過體外培養大鼠腎小管上皮細胞NRK-52E, 以溶劑作為對照組, 以1~50 ng/mL重組蛋白sonic hedgehog(Shh)或5 ng/mL TGF-β1作為誘導組, 以加入或不加入HH信號特異性阻斷劑環靶明(cyclopamine, Cyp)5 μmol/L為干預組。細胞培養24 h, 采用ELISA、qRT-PCR、免疫細胞熒光染色和Western blot等方法檢測HH信號相關分子(Ptch1、Smo和Gli1)、TGF-β1、EMT相關分子(Rac1蛋白、肌成纖維細胞標志物α-SMA和上皮細胞標志物E-cadherin)、III型膠原mRNA或蛋白的表達。結果發現, 外源性Shh上調Smo和Gli1表達, 抑制Ptch1表達, 繼而激活HH信號; HH信號活化抑制腎小管上皮細胞E-cadherin的表達, 上調α-SMA、III型膠原和TGF-β1的表達。環靶明干預后, Smo表達下調, 進而抑制HH信號、EMT和膠原累積, 并下調TGF-β1的表達。應用TGF-β1誘導小管上皮細胞EMT, 同時也上調HH信號分子Smo和Gli1的表達, 下調Ptch1的表達, 提示TGF-β1可誘導HH信號活化。綜上所述,HH信號和TGF-β1均參與了腎小管上皮細胞EMT和膠原累積過程。HH信號活化可促進TGF-β1的表達, 同時TGF-β1能激活HH信號, 推測TGF-β1與HH信號可能存在交叉對話以調控EMT和膠原累積。

Hedgehog-Gli1(HH)信號通路是一條進化保守的、與干細胞增殖分化密切相關的信號通路。正常表達的HH信號在人類發育過程中起著重要作用, 但持續異常激活的HH信號可導致胰腺癌和胃癌等多種腫瘤的發生。Z近研究發現, HH信號活化與組織纖維化的發生密切相關。我們前期的研究結果顯示, 輸尿管梗阻或者馬兜鈴酸誘導腎小管上皮細胞表型轉化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)和細胞外基質(extracellular matrix, ECM)累積過程中, HH信號均存在不同程度的活化, 同時伴有轉化生長因子TGF-β1的高表達。但HH信號與TGF-β1之間的相互關系及影響EMT和ECM累積的分子機制目前尚不清楚。本研究分別通過外源性重組蛋白活化HH信號和誘導TGF-β1高表達, 人正常組織細胞并進行藥物干預, 以觀察兩者間的對話, 評價其對EMT和ECM累積的影響。
Copovidone        100mg    共聚維酮標準品
Corn Oil (AS)    8001-30-7    1g    玉米油標準品
Corticotropin    9002-60-2    5 vails    促腎上腺皮質激素標準品
Cortisone Acetate    1950/4/4    150mg    醋酸可的松標準品
Cottonseed Oil (AS)    8001-29-4    1g    棉籽油標準品
Creatinine    60-27-5    100mg    肌酸酐標準品
Cromolyn Sodium    15826-37-6    500mg    色甘酸鈉標準品
Crospovidone    9003-39-8    100mg    交聯聚維酮對照品標準品
人正常組織細胞

 

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