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原代細胞凍存液的原理及配制方法

時間:2018-3-12閱讀:2515
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原代細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融,實驗證明這樣可以Z大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外,減少細胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法,這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結晶對細胞造成損傷。
細胞凍存是細胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實驗順利進行的重要技術手段。在細胞建株和建系中,及時凍存原始細胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過程中,雜交瘤細胞、每次克隆化得到的亞克隆細胞的凍存保種常常是*的實驗操作。因為在沒有建立一個穩(wěn)定的細胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細胞系的時候,細胞的培養(yǎng)過程中隨時可能因細胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等導致實驗失敗,如果沒有原始細胞的凍存,則因為上述的意外而前功盡棄。
1常用凍存液組成成分
20%血清(FBS)、10%DMSO、70%1640培養(yǎng)液;或90%血清(FBS)、10%DMSO,更可防止細胞內(nèi)冰晶形成。將DMSO和FBS加入DMEM中,各自含量占總體積的10%,然后濾膜過濾后分裝保存?zhèn)溆谩?br />2DMSO在凍存液中的作用
DMSO在4℃時對細胞無明顯毒性,分子量小、溶解度大、易透過細胞膜,降低細胞外未結冰溶液中溶質(zhì)濃度,使細胞免受高濃度溶質(zhì)的損傷,細胞內(nèi)水分也不會過分外滲,避免了細胞過分脫水皺縮;DMSO與水分子結合,可使冰點下降,減少細胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少冰晶損傷。
3原代細胞注意事項     
  1.DMSO 不用高壓滅菌;DMEM不能高溫高壓滅菌,可以過濾除菌。
  2.DMSO要用新的,而且要避光保存。
  3.DMSO:含10%FBS的DMEM=1:9(體積比)。
容量:        500KU    shēng huà shì jì        依來鉻氰藍R
容量:    RT    25克    shēng huà shì jì        衣康酸
容量:    RT,避光    5克    shēng huà shì jì        伊文斯藍
容量:        10片/箱    shēng huà shì jì        伊紅染液
容量:        1米    shēng huà shì jì        伊紅美蘭瓊脂平板
容量:        250克    shēng huà shì jì        伊紅美蘭瓊脂
容量:        25克    shēng huà shì jì        一氧化錫
容量:        25克    shēng huà shì jì        一氧化硅
容量:    RT    500支/包    shēng huà shì jì        一氧化氮合成酶測試盒[測總NOS(T-NOS)]
容量:    RT    50塊/盒    shēng huà shì jì        一氧化氮合成酶測試盒(測T-NOS、INOS、CNOS三型同時
容量:        10塊/包    shēng huà shì jì        一氧化氮測試盒(還原酶法)
原代細胞

 

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